液胞ATPaseの活性調節と液胞機能のダイナミックス

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10219206
• 研究機関: 帝京科学大学
• 研究代表者: 安楽 泰宏 帝京科学大学, 理工学部, 教授 (20012643)
• キーワード: 酵母 / 液胞 / V-ATPase / VMA3遺伝子 / VIS1遺伝子 / FK506

研究概要

平成12年度は免疫抑制剤FK506の添加によるCa^<2+>感受性の増強機構を解明するための実験を開始し,以下の成果を修めた.vma3変異株を親株として,FK506超感受性変異株の分離を試み,vis1変異株(vma3-dependent,immunosuppressant-sensitivemutant)を同定した.このvma3依存性vis1変異株は0.1μg/ml FK506の添加により増殖を停止した.多コピー型genomic DNA libraryを用いて,VIS1遺伝子本体および多コピー抑圧遺伝子としてUBA1遺伝子(ユビキチン活性化酵素),UBP3遺伝子(脱ユビキチン化酵素)を同定した.Vis1pは214アミノ酸残基からなる新しい膜タンパク質であり,N-末端領域に膜貫通ドメインを持ち,C-末端領域にmyristylation siteを含むことが判明した.興味深いことに,vma3ubp3二重変異株はvma3vis1二重変異株と同様にFK506に対して超感受性の表現型を示した.現在,Vis1Pの細胞内分布を決定するために必要な抗体の作成を急いでおり,Vis1pに依存する新規の細胞機構に関する生化学的研究を続行している(2001年1月8日,合同班会議(坂出市)発表).
本研究代表者は,酵母のstaurosporine感受性変異(stt)の分子生物学的研究を展開していた時期があった.この抗生物質はprotein kinase Cの特異的阻害剤として著名である.平成11-12年度の研究計画が進行している最中,たまたま,多くのstt変異株がvma表現型を示すことに気付き,この現象を系統的に解析した.この結果,stt/vps class C ＆ D typesの変異株がvma表現型を示し,その原因がV-ATPase活性の低下・欠失によることを明らかにし,論文(Mol.Gen.Genet,2000年)を発表した.

研究成果

• [文献書誌] Yoshida,S.,Anraku,Y.: "Staurosporine sensitivity of the yeast Saccharomyces cerevisiae"Mo.Gen.Genet.. 263. 877-888 (2000)
• [文献書誌] Nakajima-Shimada,J.,Sakaguchi,S.,Tsuji,F.I.,Anraku,Y.,Iida,H: "Ca^<2+> signal is generated only once in the mating pheromone response pathway in Saccharomyces cerevisiae,"Cell Struct.Funct.. 25. 125-131 (2000)
• [文献書誌] Yabe,I.,Horiuchi,K.,Nakahara,K,Hiyama,Y.,Yamanaka,Y., 他: "Preparation and Utilization of a Giant Cell Containing a Giant Vacuole"J.Biol.Chem.. 274. 34903-34910 (1999)
• [文献書誌] Yoshida,S.,Matsuura,A.,Merregaert,J.Anraku,Y.: "Schizosaccharomyces pombe stt3 is a functional homologue of Saccharomyces cerevisiae STT3 which regulates oligosaccharyltransferase activity"Yeast. 15. 497-505 (1999)