液胞ATPaseの活性調節と液胞機能のダイナミックス

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10219206
• 研究機関: 帝京科学大学
• 研究代表者: 安楽 泰宏 帝京科学大学, 理工学部, 教授 (20012643)
• キーワード: 酵母 / 液胞 / V-ATPase / VMA3遺伝子 / VIS1遺伝子 / FK506

研究概要

平成13年度は免疫抑制剤FK506の添加によるCa_<2+>感受性の増強機構を解明するための実験を継続し,以下の成果を修めた.vma3変異株を親株として,FK506超感受性変異株の分離を試み,vis1変異株(vma3-dependent, immunosuppressant-sensitive mutant)を同定した.このvma3依存性vis1変異株は0.1μg/ml FK506の添加により増殖を停止した.多コピー型genomic DNA libralyを用いて,VIS1遺伝子本体および多コピー抑圧遺伝子としてUBA1遺伝子(ユビキチン活性化酵素),UBP3遺伝子(脱ユビキチン化酵素)を同定した.Vis1Pは214アミノ酸残基からなる新しい膜タンパク質であり,N-末端領域に膜貫通ドメインを持ち,C-末端領域にmyristylation siteを含むことが判明した.興味深いことに,vma3 ubp3二重変異株はvma3 vis1二重変異株と同様にFK506に対して超感受性の表現型を示した.Ubp3pは転写のsilencingにかかわるSir4Pと相互作用し,また,分子シャペロンであるSsa1pおよびSsa2pの二重遺伝子破壊株の多コピー抑圧遺伝子産物として知られている.Vis1pの細胞内分布を決定するため,そのN-末端特異的な抗体およびHA-tag Vis1p抗体を作成し,膜画分に主として分布する知見を得た.現在,Vis1pに依存する新規の細胞機構の可能性として,ゴルジ体からmultivesicular bodyへのタンパク質輸送にユビキチン化/脱ユビキチン化と共役するプロセスがあると想定して,その生化学的検証を進めている(2001年11月27日,合同班会議(名古屋市)発表).

研究成果

• [文献書誌] Yoshidi, S., Anraku, Y.: "Staurosporine sensitivity of the yeast Saccharomyces cerevisiae"Mo. Gen. Genet.. 263. 877-888 (2000)
• [文献書誌] Nakajima-Shimada, J., Sakaguchi, S., Tsuji, F.I., Anraku, Y., Iida, H: "Ca^<2+> signal is generated only once in the mating pheromone response pathway in Saccharomyces cerevisiae"Cell Struct. Funct.. 25. 125-131 (2000)
• [文献書誌] Yabe, I., Honuchi, K., Nakahara, K, Hiyama, Y., Yamanaka, Y., 他: "Preparation and Utilization of a Giant Cell Containing a Giant Vacuole"J. Biol. Chem.. 274. 34903-34910 (1999)
• [文献書誌] Yoshida, S., Matsuura, A., Merregaert, J.Anraku, Y.: "Schizosaccharomyces pombe stt3 is a functional homologue of Saccharomyces cerevisiae STT3 which regulates oligosaccharyl transferase activity"Yeast. 15. 497-505 (1999)