生殖細胞系列の完全連続培養を可能にする生殖細胞分化促進因子の同定

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10306018
• 研究種目: 基盤研究(A)
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 佐藤 英明 東北大学, 農学部, 教授 (80093243)
• 研究分担者: 松本 浩道 東北大学, 農学部, 助手 (70241552) ; 佐々田 比呂志 東北大学, 農学部, 助手 (90158931) ; 梅津 元昭 東北大学, 農学部, 助教授 (30005649)
• キーワード: マウス / ブタ / 単為発生 / 卵形成 / 卵成熟 / 初期発生 / Primordial germ cells(PGC) / 卵母細胞

研究概要

1) MAPキナーゼがブタ卵成熟誘起の中心的役割を果たすことを明らかにした。特に卵核胞を単離する方法を開発し、ウエスタンプロット法により細胞質のMAPキナーゼは不活性型、核のMAPキナーゼは活性型であることを明らかにした。また免疫組織化学により卵核胞崩壊の直前にMAPキナーゼが核に集中することを示した。このようなことからMAPキナーゼが細胞質においてMAPキナーゼキナーゼによって活性化し、核に移行し、卵核胞崩壊を誘起するとの仮説を提出した。
2) 未分化細胞維持因子である白血病抑制因子の活性とアスパラギンにリンクするグリコシレーションの関係を明らかにした。
3) MAPキナーゼカスケード(Ras, Raf-1,14-3-3,MEK)がマウスの初期発生における卵割に関わることを明らかにした。ERKsは関与しない。
4) 初期胚における性染色体、とくにY染色体を視覚化するin situ hybridization法を開発し、性の判定された初期胚を培養する系を確立した。
5) リン酸により発生停止の誘起されるラット胚を解析し、エネルギー代謝酵素、ミトコンドリアの分布、過酸化水素の変化を観察した。
6) 膿腫卵胞から分離した卵胞液で卵母細胞を培養しても、卵母細胞はほぼ正常に成熟し、受精した。
7) 生殖細胞分化に関わる遺伝子、すなわちショウジョウバエovo遺伝子に高いホモロジーをもつ遺伝子を同定した。

研究成果

• [文献書誌] 佐藤英明: "Rapid detection of male-specific DNA sequence in bovine embryos using fluorescence in sltu hybridization" Molecular Reproduction and Development. 51. 390-394 (1998)
• [文献書誌] 佐藤英明: "MAP Kinase cascade,but not ERKs,activated during early cleavage of mouse embryos" Molecular Reproduction and Development. 51. 148-155 (1998)
• [文献書誌] 佐藤英明: "Evaluation of fluid from cystic follicles for in vitro maturation and fertilization of bovine oocytes" Theriogenology. 50. 307-320 (1998)
• [文献書誌] 佐藤英明: "Asparagine-linked glycosylation of the rat leukemia inhibitory factor expressed by Simian COS7 cells" Bioscience,Biotechnology and Biochemistry. 62. 1318-1325 (1998)
• [文献書誌] 佐藤英明: "Mitogen-activated protein kinase franslocates into the germinal vesicle and induces germinal vesicle breakdown in porcine oocytes" Biology of Reproduction. 58. 130-136 (1998)
• [文献書誌] 梅津元昭: "Evaluation and characterization of Congenital hypothyroidism in row dwarf rats" Laboratory Animal Science. 48. 496-501 (1998)
• [文献書誌] 佐藤英明: "図説産婦人科VIEW-31 生殖内分泌・不妊" メジカルビュー社, 192 (1998)
• [文献書誌] 佐藤英明: "家畜人工授精講習会テキスト,家畜人工授精編" (社)日本家畜人工授精師協会, 440 (1998)