幼若ホルモンリセプターの同定とクローニング

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10460020
• 研究機関: 三重大学
• 研究代表者: 鎮西 康雄 三重大学, 医学部, 教授 (60024709)
• 研究分担者: 三浦 健 三重大学, 医学部, 講師 (60219582)
• キーワード: 幼若ホルモン / リセプター / エクダイソン / 転写因子

研究概要

幼若ホルモン(JH)は昆虫の変態・休眠・相変異など特異な生理現象の調節に関わっている。しかしJH受容体の実体はじめそのシグナル伝達の詳細は不明である。この研究ではJH応答性転写調節因子の同定とクローニング更にはJH受容体の同定を行なって、JH-情報伝達系を解明することを目的とした。
Cyanoprotein遺伝子のJH応答配列(JHRE)とJH処理脂肪体cDNAライブラリーを用いて、以下のような実験を組み合わせることでJH応答性転写調節因子(JHRTF)をクローニングすることを試みた。
1)発現ベクター又はphageに導入したcDNAライブラリーとプローブとしてラベルしたJHREを用い、South-Western法・phage-display法によりスクリーニングする。
2)JHREとレポーター遺伝子とのDNAコンストラクト及びcDNA-Gal4 fusionライブラリーを酵母に導入し、one-hybrid法によりスクリーニングする。
3)cDNA-Gal4 fusionライブラリーと既知転写因子Gal4 fusion DNAコンストラクトとを用い、酵母two-hybrid法によりJH依存性の未知転写因子JHRTFをスクリーニングする。
これらのうち今年度に関してはone-hybrid法によるスクリーニングを行い候補となるクローンを複数個pick upし、現在それらについて解析中である。

研究成果

• [文献書誌] J.P.Charles, et al.: "Characterization and DNA-binding properties of GRF, a novel monomeric binding orphan receptor related to GCNF and_FTZ-F1."Eur.J.Biochem.,. 266. 181-190 (2000)
• [文献書誌] M.Hirai, et al.: "A juvenile hormone-repressibletransferrin-like protein from the bean bug, Riptortus clavatus : cDNA sequence analysis ans protein identification during diapause and vitellogenesis."Arch.Insect Biochem.Physiol.. 44. 17-26 (2000)
• [文献書誌] T.Shinoda, et al.: "Characterization of a recombinant insect chitinase and a baculovirus chitinase."Eur.J.Biochem.. (in press).
• [文献書誌] Y.Furuta, et al.: "Peroral infectivity of nonoccluded viruses of Bombyx mori nucleopolyhedrovirus and polyhedrin-negative recombinant baculoviruses to silkworm larvac is frastically enhanced when fed together with Anomala cuprea entomopoxvirus spindles."J.Gen.Virol.,. (in press).