1998 年度実績報告書

有用脂質生産を目指した糸状菌類の分子育種

研究課題

研究課題/領域番号	10460040
研究機関	京都大学
研究代表者	清水昌京都大学, 農学研究科, 教授 (70093250)
研究分担者	小川順京都大学, 農学研究科, 助手 (70281102) 片岡道彦京都大学, 農学研究科, 助手 (90252494)
キーワード	polyunsaturated fatty acid / arachidonic acid / γ-linolenic acid / desaturase / desaturase-mutant / Mortierella alpina
研究概要	酵母とラットから既にクローン化されている脂肪酸Δ9不飽和化酵素遺伝子の一時構造で相同性が高い二カ所に基づいてセンスおよびアンチセンス合成オリゴヌクレオチドプライマーを作製し、Mortierella alpina 1S-4のゲノムコスミドライブラリーに対しPCRを行った。得られた増幅DNA断片の塩基配列を決定したところ、既知の脂肪酸Δ9不飽和化酵素遺伝子と相同性を示したことから、次に、本DNA断片をプローブとして用い、本酵素ゲノム遺伝子のクローニングを試みた。得られたポジティブグローンの塩基配列を決定した結果、本遺伝子は既知の脂肪酸Δ9不飽和化酵素遺伝子と相同性を有することが判明した。既に報告のある高等植物と線虫のΔ6不飽和化酵素のアミノ酸配列の情報を基にオリゴヌクレオチドプライマーをデザインし、Mortierella alpina 1S-4の染色体DNAを鋳型としたPCRによりプローブを得た。このプローブを用いMortierella alpina 1S-4のcDNAライブラリーをスクリーニングした結果、Δ6不飽和化酵素をコードするcDNAを微生物から初めて取得した。推定アミノ酸配列は高等植物、線虫のΔ6不飽和化酵素とそれぞれ30.5%、34.2%の相同性を示した。Mortierella alpina 1S-4のΔ9不飽和化酵素がC末端側にシトクロームb_5モチーフを持つのに対し、本酵素はN末端側に本モチーフが認められた。本cDNAを麹菌に導入した形質転換株では、コントロールには存在しないガンマリノレン酸が全脂肪酸あたり25.2%蓄積し、天然では珍しいガンマリノレン酸含有微生物へと形質転換することに成功した。

研究成果
(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] H.Kawashima et al.: "Production of 8,11,14,17-cis-Eicosatetraenoic Acid (20:4ω3) by a Δ5 and Δ12 Desaturase-Defective Mutant of an Arachidonic Acid-Producing Fungus Mortierella alpina 1S-4" J.Am.Oil Chem.Soc.75(11). 1495-1500 (1998)
[文献書誌] K.Higashiyama et al.: "Effects of Mineral Addition on the Growth Morphology of and Arachidonic Acid Production by Mortierella alpina 1S-4" J.Am.Oil Chem.Soc.75(12). 1815-1819 (1998)
[文献書誌] M.Certik et al.: "Progress in Polyunsaturated Fatty Acid Production by Fungi" Recent Res.Devel.in Oil Chem.2. 89-103 (1998)
[文献書誌] M.Certik et al: "Desaturase-defective Fungal Mutants: Useful Tools for the Regulation and Overproduction of Polyunsaturated Fatty Acids" Trends Biotechnol.16(12). 500-505 (1998)
[文献書誌] K.Higashiyama et al.: "Enhancement of Arachidonic Acid Production by Mortierella alpina 1S-4" J.Am.Oil Chem.Soc.75(11). 1501-1505 (1998)
[文献書誌] N.Shirasaka et al.: "Microbial Conversion of Palmiteleic Acid to 9,12-Hexadecadienoic Acid (16:2ω4) by Irichodorma sp.AM076" J.Am.Oil Chem.Soc.75(6). 717-720 (1998)
[文献書誌] 清水昌: "ゴマその1科学と機能性/ゴマリグナンと微生物・脂肪酸代謝制御" 丸善プラネット,東序, 41-51 (1998)

1998 年度 実績報告書

有用脂質生産を目指した糸状菌類の分子育種

研究代表者

清水 昌 京都大学, 農学研究科, 教授 (70093250)

研究成果

[文献書誌] H.Kawashima et al.: "Production of 8,11,14,17-cis-Eicosatetraenoic Acid (20:4ω3) by a Δ5 and Δ12 Desaturase-Defective Mutant of an Arachidonic Acid-Producing Fungus Mortierella alpina 1S-4" J.Am.Oil Chem.Soc.75(11). 1495-1500 (1998)

[文献書誌] K.Higashiyama et al.: "Effects of Mineral Addition on the Growth Morphology of and Arachidonic Acid Production by Mortierella alpina 1S-4" J.Am.Oil Chem.Soc.75(12). 1815-1819 (1998)

[文献書誌] M.Certik et al.: "Progress in Polyunsaturated Fatty Acid Production by Fungi" Recent Res.Devel.in Oil Chem.2. 89-103 (1998)

[文献書誌] M.Certik et al: "Desaturase-defective Fungal Mutants: Useful Tools for the Regulation and Overproduction of Polyunsaturated Fatty Acids" Trends Biotechnol.16(12). 500-505 (1998)

[文献書誌] K.Higashiyama et al.: "Enhancement of Arachidonic Acid Production by Mortierella alpina 1S-4" J.Am.Oil Chem.Soc.75(11). 1501-1505 (1998)

[文献書誌] N.Shirasaka et al.: "Microbial Conversion of Palmiteleic Acid to 9,12-Hexadecadienoic Acid (16:2ω4) by Irichodorma sp.AM076" J.Am.Oil Chem.Soc.75(6). 717-720 (1998)

[文献書誌] 清水 昌: "ゴマその1科学と機能性/ゴマリグナンと微生物・脂肪酸代謝制御" 丸善プラネット,東序, 41-51 (1998)

1998 年度実績報告書

清水昌京都大学, 農学研究科, 教授 (70093250)

[文献書誌] 清水昌: "ゴマその1科学と機能性/ゴマリグナンと微生物・脂肪酸代謝制御" 丸善プラネット,東序, 41-51 (1998)