抗コネクシン32単クローン性抗体による細胞間ギャップ結合形成過程の全容解明

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10470006
• 研究機関: 大分医科大学
• 研究代表者: 藤倉 義久 大分医科大学, 医学部, 教授 (10165368)
• 研究分担者: 北村 裕和 大分医科大学, 医学部, 助手 (70115559) ; 伊奈 啓輔 大分医科大学, 医学部, 助教授 (20203193) ; 福本 哲夫 山口大学, 医学部, 教授 (00040171)
• キーワード: ラット / 肝臓 / ギャップ結合 / コネクシン32 / HAM8抗体 / 細胞間コミュニケーション

研究概要

1.C×32の細胞外エピトープを認識するHAM12抗体の作製
昨年度はマウスを免疫する抗原としてジフテリアトキソイドを標識した直線合成ペプチドを用いたが,組織で反応を示すような十分な多クローン性抗体は得られなかった.それで,今年度はラット肝細胞から得たギャップ結合粗分画で免疫し,アッセイの抗原に非標識直線合成ペプチドを用いてHAM12抗体の作製を試みた.しかしその血清でも未だ組織では十分な反応を示さず,細胞融合にまでは至っていない.
2.ラット肝細胞のin vivoにおけるC×32形成過程の解析
腹水型HAM8抗体をIgGに精製した後,その抗体をラットに静注し,経時的に肝臓を摘出後凍結切片を作製し,二次抗体のみで染色した.切片を蛍光顕微鏡で観察した結果,ギャップ結合斑の形成過程,形成速度を推定し,仮説を立てた.それらについては現在論文として纏め,投稿準備中である.
3.ラット肝細胞のin vitroにおけるC×32形成過程の解析
ラット肝細胞の初代培養はルーチンに行えるようになったが,倒立型・微分干渉蛍光顕微鏡下でマイクロマニュプレーター,ピコポンプ,吸引器を使った蛍光色素の微量注入技術は現在修得中である.

研究成果

• [文献書誌] Yoshimura T.et al.: "Mutation of connexin32 in Charcot-Marie-Tooth disease type X interfere with cell-to-cell communication but not cell proliferation and myelin-specific gene expression."J.Neursci.Res.. 51. 154-161 (1998)
• [文献書誌] Katsube K.et al.: "Successful nerve regeneration and persistence of donor cells after a limited course of immunosuppression in rat peripheral nerve allografts."Transplantation. 66. 772-777 (1989)
• [文献書誌] Ito H.et al.: "Bidirectional blokade of CD4 and MHC class ll molecules an effective immunosuppressive treatment in the mouse heart transplantation model."J.Heart Lung transplant.. 17. 460-469 (1998)
• [文献書誌] Tamura F.et al.: "FK 506 promotes liver regeneration by suppressing natural killer cell activity."J.Gastroent.Hepatol.. 12. 1-6 (1998)
• [文献書誌] Wang Y-H.et al.: "Vascular and stromal changes in irradiated and recovering rat thymus."Histol.Histopathol.. 14. 791-796 (1999)
• [文献書誌] Ina K.et al.: "VCAM-1 expression in the renal interstitium of diabetic KKAy mice."Diabt.Res.Clin.Prac.. 44. 1-8 (1999)