調圧伝達・脳虚血因子ドーパの証明及び同トランスポーター分子の同定・発現・機能解析

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10470026
• 研究機関: 横浜市立大学
• 研究代表者: 三須 良實 横浜市立大学, 医学部, 教授 (10025687)
• 研究分担者: 古川 信也 横浜市立大学, 医学部, 助手 (90285114) ; 佐々木 幸生 横浜市立大学, 医学部, 助手 (10295511) ; 宮前 丈明 横浜市立大学, 医学部, 助手 (00239435) ; 五嶋 良郎 横浜市立大学, 医学部, 助教授 (00153750)
• キーワード: 圧受容器情報伝達物質ドーパ / 孤束核-尾側腹外側延髄ドーパ性投射 / 孤束核単離細胞 / 高電位活性化Ca^<2+>チャネル電流促進 / ドーパトランスポーター / 4血管閉塞脳虚血 / 神経細胞死因子ドーパ / 脳虚血グルタミン酸誘発上流因子内因性ドーパ

研究概要

[I]ラット孤束核:[1]尾側腹外側延髄(CVLM)ドーパ性投射;麻酔下,(1)一側孤束核電気破壊は,同側CVLMカテコラミン含量無変化,ドーパ含量を特異的に減少,(2)フェニレフリン-圧受容器刺激は一側CVLM微量透析時,ドーパ基礎遊離を増大,同増大は同側孤束核電気的急性破壊により消失,(3)微量透析・応答測定系で,一側大動脈神経間歇刺激(30分)は,反復性の降圧・同側CVLMドーパ遊離増大を生じ,同応答・遊離増大はTH阻害薬α-MPT同側CVLM内灌流により抑制・消失,(4)微量注入・応答測定系で,一側大動脈神経刺激(10秒)による降圧は同側CVLM降圧部微量注入の競合的拮抗薬DOPA methyl ester(ME)1μgにより拮抗,圧受容器→大動脈神経→孤束核→CVLMドーパ性神経路は圧反射伝達に必須である(分担三須).[2]単離細胞パッチクランプ;ドーパ1μMのME-感受性high voltage activated Ca^<2+>channel電流増大を発見,継続(宮前).[II]4血管閉塞脳虚血線条体微量透析・病理検索:(1)10分虚血はドーパ,ドパミン(DA),グルタミン酸を誘発,(2)再交通96時間後の遅発性神経細胞死は線条体軽度〜中等度,海馬重度,(3)虚血10分前の線条体内ドーパ脱炭酸酵素阻害は,虚血によるドーパ遊離を著増,グルタミン酸遊離を有意増大,DA遊離を減少傾向,同神経細胞死を増悪,(4)強力・比較的安定な新競合的拮抗薬DOPA cyclohexyl ester 10-100nM線条体内灌流は虚血によるグルタミン酸遊離に用量依存性に拮抗,DA遊離を無修飾,神経細胞死を保護,(5)両薬物は海馬神経細胞死に無影響(古川,五嶋).[III]ドーパトランスポーター:ウサギ小腸上皮poly A+RNA注入ツメガエル卵母細胞で,Na^+依存性,Cl-非依存性^<14>C-ドーパ取込活性(Km=20-30μM)を発見,同活性はチロシン,フェニールアラニン,リジンで阻害,中性アミノ酸活性化因子rBATのアンチセンスRNAにより消失,rBATと結合する,ドーパ輸送分子解析を継続(五嶋,佐々木).

研究成果

• [文献書誌] 古川信也、新井信隆、三須良實: "ドーパはグルタミン酸遊離-神経細胞死の上流因子か、「ニューロン死を標的とした神経疾患治療薬」" 医学のあゆみ. 186. 791-795 (1998)
• [文献書誌] Miyamae T.Misu Y et al.: "Some interactions of L-DOPA and its related compounds with Blutamate receptors." Life Sci. 64. 1045-1054 (1999)
• [文献書誌] Hiyamae T.Misu Y et al.: "L-DOPAergic components in the caudal ventrolateral medulla paroreflex neurotransmission of rats" Neuroscience. 00. 000-000 (1999)
• [文献書誌] Nishihama M.Misu Y et al.: "An L-DOPAergic relay from the posterior hypothalamic nucleus to the rostral ventrolateral medulla and its cardiovascular furctions in onesthetized rats." Neuroscience. 00. 000-000 (1999)
• [文献書誌] Goshima Y.Misu Y et al.: "The evidence for tonic GABAergic regulation of basal L-DOPA release via activation of inhibitory 6ABA_A receptors in the necleus tractus solitari of aresthetized rats." Neurosci Lett. 00. 000-000 (1999)
• [文献書誌] Honjo K、Misu Y et al.: "6ABA may function tonically via 6ABA_A receptors to inhibit hypotensjon and bradycardia by L-DOPA microinieted into depressor sites of the nuclens tractus solitarii in anesthetized rats." Neurosci Lett. 00. 000-000 (1999)
• [文献書誌] 新井信隆、古川信也、三須良實: "ドーパはグルタミン酸遊離-神経細胞死の上流因子か-ドーパ新競合的拮抗薬の保護作用-別冊・医学のあゆみ「神経細胞死制御」三須良實、赤池昭紀編、134-138" 医学のあゆみ, 260 (1998)