| 研究課題/領域番号 |
10470040
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 研究機関 | 岡山大学 |
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研究代表者 |
清水 憲二 岡山大学, 医学部, 教授 (10037286)
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| 研究分担者 |
郭 春鋼 岡山大学, 医学部・附属病院, 医員
堺 明子 岡山大学, 医学部, 医員 (60205698)
藤原 田鶴子 岡山大学, 医学部, 助手 (70108166)
小田 慈 岡山大学, 医学部・附属病院, 講師 (50160875)
大内田 守 岡山大学, 医学部, 助教授 (80213635)
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| キーワード | p107遺伝子 / 遺伝子内欠失 / K-ras遺伝子 / 活性化変異特異的診断 / ヘテロ接合性消失 / 癌抑制遺伝子 / チロシンホスファターゼ / 末梢血遺伝子診断 |
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| 研究概要 |
【緒言】本研究では、新規に創案した遺伝子解析法などを用いて、個々の癌および末梢血などの非浸襲的検体の遺伝子異常を広範に検索し、癌化の機構解明と共に新しい癌の遺伝子診断や早期発見法を確立することを目的とした。
【方法】1,研究検体を確保するために、岡山大学腫瘍バンクを設立し、これまでに約1,000例の腫瘍-正常組織対を収集した。2,マクロな遺伝子異常検出法としてInter-Alu Long-PCRゲノムスキャン法をミクロな遺伝子異常検出法として遺伝子全領域マルチSSCP法を開発した。3,既知の方法の他、ras遺伝子の第61コドンの変異を特異的にかつ高感度に検出するEnriched PCR法と蛍光標識によるマイクロサテライト(MS)解析法を開発した。
【結果】2の方法により複数の腎癌において共通のLOHが見られた領域はRadiation Hybrid法によってヒト染色体14長腕にマップされ、腎癌における新しいLOH領域の発見となった。更にこの領域のBACクローンを分離することに成功し、癌抑制遺伝子候補のエキソンの同定を進めている。同じ方法によって、網膜芽細胞腫遺伝子(RB)群のp107遺伝子の初めての異常を3例のリンパ球系腫瘍から発見し、そのうち1例は遺伝子内の15kbpの領域の欠失であることを発見した。また、p107遺伝子の90kbpに渡る全構造を決定し、エキソン22個を含むこと、リンパ腫で発見された遺伝子内欠失はエキソン5個を含む15kbpの領域がAlu配列間の組変えによって欠失したことを発見した。また極めて最近、ヒト染色体3p21領域に局在する新たな癌抑制遺伝子候補を発見し、遺伝子全体構造を解明すると共に、それが全く新しいチロシンホスファターゼをコードすること、ある肺小細胞癌細胞株では1遺伝子座位の欠失と残っている遺伝子上に点突然変異があることを発見した。3の方法により、肺癌、大腸癌ではK-ras第61コドンの変異は極めて低頻度であることを見い出した。また、MS解析法により、肝癌における第8染色体短腕の高頻度欠失を見い出し、その領域を含むYACクローンを分離した。同じく頭頸部癌で高頻度の欠失を示すヒト染色体13q33領域の癌抑制遺伝子候補、INGI遺伝子の全体構造を解明した。末梢血診断に関しては、血中遊離DNAの解析によって膵癌患者の早期診断が可能なこと、原発癌よりも血中遊離DNAの遺伝子異常が増加している患者は遠隔転移を起こしやすいことなどを明らかにした。
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