肝障害の発生・進展に果たすアポトーシスの意義解明とその阻止

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10470142
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 研究機関: 愛知医科大学
• 研究代表者: 各務 伸一 愛知医科大学, 医学部, 教授 (10115545)
• 研究分担者: 若林 隆 名古屋大学, 医学部, 教授 (00079998) ; 西沢 祐治 名古屋大学, 医学部, 助手 (80252229) ; 石川 哲也 愛知医科大学, 医学部, 講師 (10288508)
• キーワード: アポトーシス / ミト形態制御遺伝子 / フリーラジカルスカベンジャー / フリーラジカル / mdm10 / mmm1 / アルコール肝障害 / ミト巨大化

研究概要

1) 酵母ミトコンドリア形態制御遺伝子mmm1,mdm10の、哺乳動物細胞への導入:酵母胞でミトコンドリア(ミト)形態を制御し、その欠損によりミト巨大化が報告されているmmm1,mdm10のプライマーを用いRT-PCR法で増幅し、HAプローブを組み込ませて発現ベクターを作成し、Lipofection法によりRL-34,MDCK両細胞に導入した。現在、細胞内局在を同定中。permancell lineが確立出来たら、これを用いてミト巨大化条件下でミト形態変化を検討する。
2) 培養細胞系でのミト巨大化実験モデルの確立と、ミト巨大化へのフリーラジカルの普遍的関与の証明:初代培養肝細胞系でのミト巨大化モデルの確立につづき、RL-34,IAR-20,Cos-1細胞でミト巨大化を確立すると共に、H_2O_2でもミト巨大化する事を見出しフリーラジカルの関与を一層実なものとした。
3) フリーラジカルスカベンジャーによるエタノールによるミト巨大化の阻止:4-OH-TEMPOによりエタノールによるラット肝ミト巨大化の阻止及び肝障害の軽減に成功すると共に、ROS上昇の一部はxanthine oxidaseの亢進による事を見出した。
4) ミト巨大化とアポトーシスの相関:フリーラジカルにより形成される巨大ミトのROS産生能、membrane potential、cytochrome c等の詳細な解析により、巨大ミト膜のmegachannelsが開きミトが二次的に膨化、cytochrome c,のミトからの流出、membrane potentialの低下をきたしアポトーシスを招来する事をみいだした。

研究成果

• [文献書誌] Furuta,K.Misao,S.et al.: "A gene mutation of transforming growth factor β1 type II receptor in hepatocellular carcinoma." Int.J.Cancer(in press).
• [文献書誌] Ishikawa,T.Kono,D.et al.: "Polyclonality and multispecificity of the cytotoxic T lymphocyte response to a songle viral epitope." J.Immunol.161. 5842-5850 (1998)
• [文献書誌] Hattori,M.Yoshioka,K.et al.: "Broadly reactive antibodies to hypervariable region 1 in hepatitis C virus-infected patient patient sera : relation to viral loads and response to interferon." Hepatology. 27. 1703-1710 (1998)
• [文献書誌] Kakumu,S.Sato,K.et al.: "Prevalence of hepatitis B, hepatitis C, and GB virus C/hepatitis G virus infections in liver disease patients and inhabitants in Ho Chin Minh, Viet Nam." J.Med.Virol.54. 243-248 (1998)
• [文献書誌] Okumura,A.Yoshioka,K.et al.: "Different constitution of hepatitis C virus population in peripheral blood mononuclear cells and plasma in patients with type C chronic liver disease." Dig.Dis.Sci.43. 377-383 (1998)
• [文献書誌] Karbowski,M., Kurono,C., et al.: "Cycloheximide and 4-OH-TEMPO suppress chloramphenicol-induced apoptosis in RL-34 cells via the suppression of the formation of megamitochondria." Biochim.Biophys.Acta.144. 25-40 (1999)
• [文献書誌] Karbowski,M., Kurono,C., et al.: "Free radical-induced megamitochondria formation and apoptosis." Free Rad.Biol.Med.26. 396-409 (1999)
• [文献書誌] Kamimoto,T., Nagai,Y., et al.: "Dymple, a novel dynamin-like high molecular weight GTPase lacking a proline-rich carboxy1-terminal domain in mammalian cells." J.Biol.Chem.273. 1044-1051 (1999)
• [文献書誌] Matsuhashi,T., Karbowski,M., et al.: "Complete suppression of ethanol-induced formation of megamitochondria by 4-hydroxy-2, 2, 6, 6-tetramethylpiperidine-l-oxyl (4-OH-TEMPO)." Free Rad.Biol.Med.24. 139-147 (1998)
• [文献書誌] Popinigis,J., Antosiewicz,J., et al.: "Dysfunction of the outer mitochondria membrane seems to be compensated inside the cell by the formation of megamitochondria." Polish J.Environmental Studies. 7. 371-372 (1998)