アンチフェクションによる標的細胞特異的遺伝子導入と異常細胞クローンの増殖制御

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10470173
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 土屋 滋 東北大学, 加齢医学研究所, 教授 (30124605)
• 研究分担者: 峯岸 正好 東北大学, 加齢医学研究所, 助教授 (20211592)
• キーワード: WASP遺伝子野性型 / WASP遺伝子変異型 / GFP融合蛋白 / フローサイトメーター

研究概要

1. 今年度ばWASP遺伝子全長cDNA(野性型)をもとに、以下の変異体を作製した。
1)WASP△PH(PHドメイン欠失変異型、アミノ酸番号1-136を欠失)
2)WASP△GBD(GTPase結合ドメイン欠失変異型、アミノ酸番号146-265を欠失)
3)WASP△Pro(プロリンリッチドメイン欠失変異型、アミノ酸番号266-416を欠失)
4)WASP△C(C端のアクチン結合ドメインを含む領域欠失変異型、アミノ酸番号420-502を欠失)
2. 野生型および変異型についてGFP融合蛋白質として発現させるために、pEGFP-C1に組み込んだ各プラスミドをCOS-7に導入し、抗WASP抗体及び抗GFP抗体を用いたウェスタンブロット法により、各蛋白質の発現を確認した。pEGFP-C1ベクター を用いる利点は、導入遺伝子の発現を緑色蛍光を目安にして、フローサイトメーターで検出可能な点である。
3. 以上の変異型WASP遺伝子系を用いて、我々の作製した抗WASP単クローン抗体が、WASPの137-266アミノ酸を認識していることを明らかにした。
4. フローサイトメーターによる細胞内GFPの検出系を確立した。

研究成果

• [文献書誌] Futatani T et al.: "Deficient expression of Bruton's tyrosine kinase in monocytes from X-linked agammaglobulinemia as evaluated by flowcytometric analysis" Blood. 91. 595-602 (1998)
• [文献書誌] Sasahara Y et al: "Epstein-Barr virus-associated lymphoproliferative disorder after unrelated bone marrow transplantation in a young child with Wiskott-Aldrich syndrome" Pediatric Hematology and Oncology. 15. 347-352 (1998)
• [文献書誌] Kumaki S et al.: "Prolonged secretion of IL-15 in patients with severe forms of graft-versus-host disease after allogeneic bone marrow transplantation in children" International J Hematology. 67. 307-312 (1998)
• [文献書誌] Hossain A et al: "The Ah receptor is not involved in 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin-mediated apoptosis in human leukemic T cell lines" J of Biological Chemistry. 273. 19853-19858 (1998)
• [文献書誌] Imaizumi M et al: "Mutation in the E-domain of RAR α portion of the PML/RAR α chimeric gene may confer clinical resistance to all-trans retinoic acid in APL" Blood. 92. 347-382 (1998)
• [文献書誌] Kumaki S et al: "Functional role of interleukin-4(IL-4)and IL-7 in the development of X-linked severe combined immunodeficiency" Blood. 93. 607-612 (1999)