腎疾患に対する遺伝子治療法の確立

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10470218
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 檜垣 實男 大阪大学, 医学部, 助教授 (70189744)
• 研究分担者: 森下 竜一 大阪大学, 医学部, 助教授 (40291439) ; 守口 篤 大阪大学, 医学部, 助手 (10273666) ; 松本 邦夫 大阪大学, 医学部, 助教授 (90201780) ; 金田 安史 大阪大学, 医学部, 教授 (10177537)
• キーワード: 遺伝子治療 / アンチセンス / デコイ

研究概要

本年度は、遺伝子治療用ストラテジーの開発を主に行った。我々はそのターゲットとして肝細胞増殖因子(HGF)に注目した。まず最初に腎臓におけるHGFの役割について詳細に検討し、以下の知見を得た。1)メサンギウム細胞には増殖作用を示さないが、尿細管上皮細胞には増殖作用を示す(Kidney Int 1998,Kidney Int 1998)。2)高血圧性の腎障害に対してアジジオテンシン変換酵素投与により腎障害が改善されたが、そのメカニズムとしてはHGFが関与している(日本腎臓学会発表)。3)虚血により尿細管上皮細胞に誘導されたアポトーシスをHGFが抑制する。そのメカニズムについては現在検索中である。HGFの作用に関してはその他、血管平滑筋細胞や血管内皮細胞を用いても検討し、今後の遺伝子治療ストラテジー開発へのステップと考えている。また、遺伝子導入用ベクターの開発はまずこれまでに確立したHVJ-リポソーム法の改良に重点をおいた。具体的にはリポソーム組成を変更し、その導入効率について検討する。また導入する方法自体にも改良を加え、静脈及び尿管を一時的にクランプして導入効率がどうのように変化するかについて検討した。その結果としては以下のように要約できる。1)リポソームの組成を変えてリポソーム自体を陰性に荷電するとin vivoにおける腎糸球体への導入効率は有意に上昇した。しかし、培養細胞に対しては逆に導入効率は低下した。2)技術的にはできるだけHVJ-リポソーム液を腎臓に溜め込むほうが導入効率が上昇する。つまり静脈及び尿管をクランプした方が導入効率が良かった。さらにリポソームに修飾を加え、腎臓のターゲッティングも試みており、改良された導入方法を用いて検討した結果、その毒性についてはまず問題がないという結果を得ている。今後はさらにその方法を用いて治療ストラテジーの開発を目指す。

研究成果

• [文献書誌] Y Yo,R Morishita,K Yamamoto,N Tomita: "Actions of hepatocyte growth factor as a local modulator; Potential role of the pathogenesis of renal disease" Kidney International. 53. 50-58 (1998)
• [文献書誌] R Morishita,S Nakamura,S Hayashi,M Aoki: "Contribution of a vascular modulator,Hepatocyte Growth Factor (HGF),to the pathogenesis of cardiovascular disease" Journal of Atheroscleorosis and Thrombosis. 4. 128-134 (1998)
• [文献書誌] R Morishita,J Higaki,N Tomita,T Ogihara: "Application of transcription factor decoy strategy as means of gene therapy and study of gene expression in cardiovascular disease" Circulation Research. 82. 1023-1028 (1998)
• [文献書誌] N Tomita,M Horiuchi,S Tomita,GH Gibbons: "A Novel strategy transcription factor decoy for E2F inhibitws proliferation in mesangial cells in vitro" American Journal of Physiology. 275. F278-F284 (1998)
• [文献書誌] R Morishita,K Yamamoto,S Yamada,H Matsushita: "Stimulatory effect of lipoprotein(a) on proliferation of human mesangial cells: Role of lipoprotein(a) in renal disease" Biochemical and Biophysical Research Communications. 249. 313-320 (1998)
• [文献書誌] Y Yo,R Morishita,N Tomita,S Nakamura: "Potential role of hepatocyte growth factor in the maintenance of renal structure: Antiapoptotic actions of HGF on epithelial cells" Kidney International. 54. 1128-1138 (1998)