劇症肝炎低抗生モデル動物の作製のその解析

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10470253
• 研究機関: 浜松医科大学
• 研究代表者: 三浦 直行 浜松医科大学, 医学部, 教授 (40165965)
• 研究分担者: 佐藤 英二 浜松医科大学, 医学部, 助手 (70118751) ; 呉 一心 浜松医科大学, 医学部, 助手 (60283363) ; 吉田 進昭 東京大学, 医科学研究所, 教授 (10250341)
• キーワード: Rb蛋白 / トランスジェニック マウス / アポトーシス / 肝細胞癌 / 結節 / HNF1 / 化学発癌

研究概要

全身に発現するのではなく、化学発癌系の利用できる肝臓にRb遺伝子を発現するために主に肝臓で発現しているHepatocyte Nuclear Factor-1(HNF-1)遺伝子プロモーターの支配下にヒトRb遺伝子を連結して、トランスジェニックマウスを作製し、2系統のトランスジェニックマウスを得た。A系統のマウスはトランスジーンを1倍体当たり11コピーもち、B系統のマウスは1倍体当たりトランスジーンを4コピーもっていた。Rb蛋白を肝臓に大量に発現するトランスジェニックマウスではアポトーシスを誘導する抗Fas抗体やTNFα投与時における劇症肝炎が起こらないことが判明した。次に、このトランスジェニックマウスが化学発癌抵抗性を示すかどうかを検討した。化学発癌にはRbトランスジェニックマウス雌とC3H雄のF1(遺伝子背景:B6C3F1)を用いる。F1の内、ヒトRbトランスジーンを持たないマウスをコントロール、トランスジーンを持つマウスを実験とする。肝臓化学発癌プロトコールは以下のようにする。まず、生後6週齢のマウスにジエチルニトロソアミン(DEN)を腹腔内投与し、1週後からフェノバルビタール含有水を35週継続飲水させる。コントロールマウス、Rbトランスジェニックマウス肝臓の病理標本を作製し、腫瘍性病変の性質、悪性度、頻度を検討した。コントロールマウスでは、肝細胞癌と多数の結節が誘導された。Rbトランスジェニックマウスでは、結節数が明らかに減少した。また、肝細胞癌の出現は認められなかった。以上の結果から、Rb蛋白は生体の中では、発癌抑制に働いていることが明らかになった。

研究成果

• [文献書誌] Terada,K.: "Biliary excretion of copper in LEC rat after introduction of copper transporting P-type ATPase, ATP7B"FEBS Letter. 448. 53-56 (1999)
• [文献書誌] Furumoto,T.: "Notochordo dependent expression of MFH-1 and Pax-1 cooperates to maintain the proliferation of sclerotome during the vertebral column development"Dvev.Biol.. 210. 15-29 (1999)
• [文献書誌] Masuda,Y.: "The fragment of complement 3a lacking the primary 9 amino acids induces promoting activity on mouse voluntary running"Tohoku J.Exp.Med.. 189. 21-27 (1999)
• [文献書誌] Komatsu,M.: "Cisplation resistance conferred by copper transporting P-type ATPase cDNA(ATP7B)"Cancer Res.. (印刷中).
• [文献書誌] Yang,X,-L.: "MFH-1 is required for Bone-Morphogenetic Protein-2-induced osteoblastic differentiation of C2C12myoblasts"FEBS Letter. (印刷中).
• [文献書誌] Sugiyama,T.: "Tissue Engineering for Therapeutic Use 3"Elsevier Science B.V. (1999)
• [文献書誌] 三浦直行: "Vascular Biology ナビゲーター"メディカルレビュー社 (印刷中).