進行消化器癌に対する免疫遺伝子治療と自殺遺伝子治療の併用療法の確立

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10470263
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 研究機関: 和歌山県立医科大学
• 研究代表者: 山上 裕機 和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (20191190)
• 研究分担者: 中森 幹人 和歌山県立医科大学, 医学部, 大学院生 ; 角田 卓也 和歌山県立医科大学, 医学部, 助手 (30275359) ; 岩橋 誠 和歌山県立医科大学, 医学部, 助手 (70244738) ; 谷村 弘 和歌山県立医科大学, 医学部, 教授 (10026990)
• キーワード: 消化器癌 / 遺伝子治療 / アデノウイルスベクター / 免疫遺伝子 / 自殺遺伝子

研究概要

平成10年度の研究から,以下の実績を得た.
1. 組み換えadenoviralvector(Ad)の作成
murineIL-2cDNAもしくはE.coli由来cytosine deaminase(CD)cDNAをそれぞれcodingするplasmidから制限酵素で切り出したプロモーター+目的遺伝子(IL-2cDNAまたはCD cDNA)+polyA配列の部分をadenovirus5型ゲノムのほぼ全長を含む発現cosmidに組み込んだ後,COS-TPC法により組み換えadenoviralvector,AdmIL-2,AdCDを作成できた.
さらに,CsClを用いた2段階濃縮法を用いて,それぞれのAdの感染力価を10^<11>Pfu/mlにまで高めることができた.
2. 組み換えadenoviral vectorのin vitroでの発現
大腸癌細胞株CT26にAdmIL-2を感染させた結果,MOI(重複感染率)依存性にIL-2を産生し,MOIが1でも2.55ng/mlの産生を得ることができた.また,AdmIL-2とAdCDを重複感染させてもIL-2の産生に影饗を及ぼすことはなかった.
AdCD導入CT26細胞は250μg/mlの濃度の抗真菌薬5-fluorocytosine(5-FC)存在下にて,MOI 10でも有意に細胞増殖の抑制効果を示し,その効果はMOI依存性に増加した.
さらに,AdCD導入CT26と親株CT26細胞の混合培養にて,遺伝子導入細胞が20%存在するだけで有意なbystander effectを示し,dual chamberを用いた細胞接触の条件でも,親株CT26細胞の増殖を抑制するneighborcellkilling effectを示すことが判明した.
以上の研究実績は当該年度予定を達成している.

研究成果

• [文献書誌] YAMAUE H et al: "Multidisciplinary treatment for gastric cancer patients by chemoimmunotherapy." Hepato-Gastroenterology. 46(in press). (1999)
• [文献書誌] HOTTA T et al: "P-glycoprotein expression and chemosensitivity in highly purified fresh human gastrointestinal cancer cells." Hepato-Gastroenterology. 46(in press). (1999)
• [文献書誌] TANI M et al: "Newly established human duodenal carcinoma cell line;WDC-1." Jpn J Cli Oncology. 29(in press). (1999)
• [文献書誌] HOTTA T et al: "P-glycoprotein-expressing tumor cells are resistant to anticancer drugs in human gastrointestinal cancer" Surgery Today. 29(in press). (1999)