| 研究課題/領域番号 |
10470447
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(B)
|
| 研究機関 | 徳島大学 |
|---|
研究代表者 |
日野出 大輔 徳島大学, 歯学部, 助教授 (70189801)
|
|---|
| 研究分担者 |
田部 慎一 徳島大学, 歯学部附属病院, 助手 (40284301)
三木 修 徳島大学, 歯学部附属病院, 助手 (30284300)
杉山 明子 徳島大学, 歯学部, 助手 (90304534)
吉岡 昌美 徳島大学, 歯学部附属病院, 講師 (90243708)
中村 亮 徳島大学, 歯学部, 教授 (30034169)
|
|---|
| キーワード | 熱ショック蛋白質 / 歯周病原細菌 / 病原因子 / 精製 / 炎症性サイトカイン / ヒト歯肉線維芽細胞 |
|---|
| 研究概要 |
歯周病原細菌のうちCampylobacter rectus菌体より熱ショック蛋白質の1つであるGroEL様蛋白質の抽出を試みた。ATP-agaroseカラムを用いたアフィニティークロマトグラフィーと高速液体クロマトグラフィーによるゲルろ過にて分離を行った結果、SDS-PAGEにて64kDaを示す均一な蛋白質を精製することが出来た。この蛋白質の推定分子量はゲルろ過用の最大マーカーである.440 kDa蛋白質のフェリチンより大きいことから、未変性の状態では何量体かの複合体を形成していることが予想された。続いて、健康人の歯肉組織より採取し培養した歯肉線維芽細胞(HGF)を用いて、GroEL様蛋白質による影響を調べた。WST-1を用いた細胞毒性試験ではC.rectus精製蛋白質もコントロールサンプルとして用いたE.coli GroELもHGFに対する影響は認められなかった。一方、これらの刺激によるHGFからの炎症性サイトカイン(IL-6及びIL-8)放出の可能性についても検索した。精製蛋白質を作用させた細胞を22時間培養し、その培養上清中のIL-6量及びIL-8量を市販のELISA法によるサイトカイン検出キットを用いて調べた。その結果、C.rectus GroEL様蛋白質により刺激を受けたHGFは未刺激のHGFに比較して5.4倍のIL-6、3.5倍のIL-8を上清中に分泌していることが明らかとなった。またこの値は両者ともE.coli GroELの場合より高い値であった。現在、mRNAレベルにおいてもこの蛋白質によりHGFがサイトカインの産生を増幅しているか検索中である。
|
