| 研究課題/領域番号 |
10480197
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
饗場 篤 東京大学, 医科学研究所, 助教授 (20271116)
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| 研究分担者 |
中尾 和貴 東京大学, 医科学研究所, 寄付研究部門教員 (20217657)
中村 健司 東京大学, 医科学研究所, 助手 (90253533)
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| キーワード | MAPキナーゼ / Ras / チロシンリン酸化 / NMDA受容体 / Src / Fyn / ノックアウトマウス / ERK |
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| 研究概要 |
1) rasノックアウトマウスでのMAPキナーゼ(ERK)活性測定
シナプス伝達の長期増強が増加したH-rasノックアウトマウス海馬でのERKの活性および発現量を測定した。活性測定は、基質となるミエリン塩基性蛋白質のゲル内リン酸化法により行い、活性化型(リン酸化)ERKを特異的に認識する抗体を用いたWestern blott解析によっても検討した。その結果、H-rasノックアウト海馬ではERKの発現量に変化はないが、ERKの活性が野生型の約80%に減少していることが明らかとなった。このことは、中枢神経系でERKがH-Ras蛋白質のターゲットとして働いていることをin vivoで初めて確認したことになる。
2) rasノックアウトマウスでのリン酸化酵素の活性化
H-rasノックアウトマウス海馬では、NMDA受容体活性化が生じている。NMDA受容体各サブユニットに対する特異的抗体による免疫沈降、および抗リン酸化チロシン抗体によるWestern blott解析から、NR2AおよびNR2Bサブユニットのチロシンリン酸化量の昂進が明らかとなった。また、H-rasノックアウトマウスでのチロシンリン酸化は、海馬粗抽出液を用いた抗リン酸化チロシン抗体によるWestern blott解析や、in vitroでの海馬粗抽出液のチロシンリン酸化活性の測定から、NMDA受容体特異的ではなく、チロシンリン酸化酵素活性の上昇によるものであると考えられた。
3) NMDA受容体のチロシンリン酸化による活性制御は、SrcもしくはFyn等のSrcファミリーキナーゼによって行われていると考えられている。そこで、Rasによる制御を受けるチロシンリン酸化酵素特定のため、H-ras、fynダブルノックアウトマウス、H-ras、srcダブルノックアウトマウスを作成した。
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