1998 年度実績報告書

小脳顆粒細胞のアポトーシスに関する分子細胞生物学的研究

研究課題

研究課題/領域番号	10480216
研究機関	大阪大学
研究代表者	畠中寛大阪大学, 蛋白質研究所, 教授 (60208519)
研究分担者	池内俊彦大阪大学, 蛋白質研究所, 助教授 (20093362)
キーワード	アポトーシス / PI3キナーゼ / SNF1 / ニューロトロフィン / 高カリウム培地 / 小脳顆粒細胞 / リン酸化 / 低カリウム培地
研究概要	分子レベルで神経細胞死の機構を研究する時、培養小脳顆粒細胞がモデルとしてよく用いられている。生後11日のラットから小脳顆粒細胞を高カリウム培地で4日間培養し、低カリウム培地に置換した。この時、置換後3時間まではRNA合成阻害剤で抑制されることがわかった。そこで、置換前と後3時間後の培養細胞からRNAを抽出し、逆転写酵素を用いてcDNAを合成しdifferential subtractionを行った。その結果、いくつかのクローンを候補として見出した。その一つ、SNF1 related kinase(SNRK)を見いだした。SNRK蛋白質はin vitro translationの結果、81kDaのバンドが検出され、これは、SNRKの分子量に相当する。また、SNRKのN-terminalに対する抗体と免疫沈降すると、同様に81kDaのバンドが検出された。ラット小脳の内因性のSNRKのimmunoblottingの結果では、65kDaのバンドが検出された。このバンドはCOS細胞やPC12細胞でも見つかった。内因性のSNRKの経時発現変化を見てみると、SNRKmRNAの経時発現変化と同じように、低カリウム培地置換後3時間後から蛋白質の発現量が上がっていることがわかった。これらの結果より、SNRKは培養ラット小脳顆粒細胞における低カリウム培地置換による細胞死に関与しているとことがわかった。しかし、SNRKの制御はプロセッシングによってなされていると思われるが、その機構は明らかではない。また、先に報告されたSNFlのように、SNRKもtranscription factorを制御する可能性があると思われる。ラット顆粒細胞のアポトーシスに関与することが明らかになったSNRKは、今後の細胞死のメカニズムの解明に貢献できると思われる。

研究成果

(8件)

すべてその他

すべて文献書誌 (8件)

[文献書誌] 下家浩二ら: "Inhibition of phosphatidylinositol 3-kinase activity elevates c-Jun N-ter-minal kinase activity in apoptosis of cultured cerebellar granule neurons" Dev.Brain Res.,. 112. 245-253 (1999)
[文献書誌] 山田雅司ら: "BDNF stimulates interaction of Shp2 with PI3-K and Grb2 in cultured cerebral cortical neurons" J.Neuochem.,. (印刷中). (1999)
[文献書誌] 佐藤託実ら: "Production of reactive oxygen species and release of L-glutamate dur-ing superoxide anion-induced apoptosis of cerebellar granule neurons" J.Neurochem.,. 70. 316-324 (1998)
[文献書誌] 荒木敏行ら: "Changes in c-Jun but not Bcl-2 family proteins in p53-dependent apoptosis of mouse cerebellar granule neurons induced by DNA demaging agent bleomychin" Brain Res.,. 794. 239-247 (1998)
[文献書誌] 武井延之ら: "Brain-derived neurotrophic factor induces rapid and transient release of glutamate through the non-exocytotic pathway from cortical neurons" J.Biol. Chem.,. 273. 27620-27624 (1998)
[文献書誌] 下家浩二ら: "Synthetic lipid products of PI3-kinase which are added to culture medium prevent low K^+-induced apoptosis of cerebellar granule neurons via Akt kinase activation" FEBS Lett.,. 437. 221-544 (1998)
[文献書誌] 山田雅司ら: "Neural Development," Springer,Tokyo, 544 (1998)
[文献書誌] 畠中寛: "タンパク質ものがたり" 化学同人, 213 (1998)

1998 年度 実績報告書

小脳顆粒細胞のアポトーシスに関する分子細胞生物学的研究

研究代表者

畠中 寛 大阪大学, 蛋白質研究所, 教授 (60208519)

研究成果

[文献書誌] 下家浩二ら: "Inhibition of phosphatidylinositol 3-kinase activity elevates c-Jun N-ter-minal kinase activity in apoptosis of cultured cerebellar granule neurons" Dev.Brain Res.,. 112. 245-253 (1999)

[文献書誌] 山田雅司ら: "BDNF stimulates interaction of Shp2 with PI3-K and Grb2 in cultured cerebral cortical neurons" J.Neuochem.,. (印刷中). (1999)

[文献書誌] 佐藤託実ら: "Production of reactive oxygen species and release of L-glutamate dur-ing superoxide anion-induced apoptosis of cerebellar granule neurons" J.Neurochem.,. 70. 316-324 (1998)

[文献書誌] 荒木敏行ら: "Changes in c-Jun but not Bcl-2 family proteins in p53-dependent apoptosis of mouse cerebellar granule neurons induced by DNA demaging agent bleomychin" Brain Res.,. 794. 239-247 (1998)

[文献書誌] 武井延之ら: "Brain-derived neurotrophic factor induces rapid and transient release of glutamate through the non-exocytotic pathway from cortical neurons" J.Biol. Chem.,. 273. 27620-27624 (1998)

[文献書誌] 下家浩二ら: "Synthetic lipid products of PI3-kinase which are added to culture medium prevent low K^+-induced apoptosis of cerebellar granule neurons via Akt kinase activation" FEBS Lett.,. 437. 221-544 (1998)

[文献書誌] 山田雅司ら: "Neural Development," Springer,Tokyo, 544 (1998)

[文献書誌] 畠 中 寛: "タンパク質ものがたり" 化学同人, 213 (1998)

1998 年度実績報告書

畠中寛大阪大学, 蛋白質研究所, 教授 (60208519)

[文献書誌] 畠中寛: "タンパク質ものがたり" 化学同人, 213 (1998)