ブタ用多価組み換えウイルス生ワクチンの開発

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10556073
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 堀本 泰介 東京大学, 医科学研究所, 助教授 (00222282)
• 研究分担者: 五藤 秀男 東京大学, 医科学研究所, 助手 (50323639) ; 前田 健 山口大学, 農学部, 助教授 (90284273) ; 川口 寧 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 助教授 (60292984)
• キーワード: ブタサイトメガロウイルス / ベータヘルペスウイルス / 糖蛋白質 / PCR

研究概要

ブタ用多価組み換えウイルス生ワクチンを開発するために、ブタサイトメガロウイルス(PCMV)のベクター化を検討した。その基礎知見の獲得のためPCMVのゲノム構造および主要蛋白質の性状解析を実施した。本年度は、PCMVの感染性および宿主の免疫応答に重要な役割をするエンベロープ糖蛋白遺伝子およびその周辺の遺伝子クラスターの同定、解析を行った。EcoRI処理したPCMVのDNAフラグメントをクローニングし、エンベロープ蛋白gB(gB)遺伝子、DNA polymerase遺伝子とTransport protein遺伝子の一部が存在するクローンを分離した。Primer walkingにより、gB遺伝子の塩基配列を決定し、gB遺伝子は860アミノ酸をコードする2583塩基から構成されていること、また、17個のN-リンク糖鎖の存在、および細胞内プロテアーゼによる開裂性などを推定した。また、システイン残基の保存性より他のヘルペスウイルスgB蛋白質と構造的な類似性が認められた。さらに、PCMV感染の有無を判定する高感度で特異性の高いMCP遺伝子配列に基づくPCR法を検討した結果、実験室株および野外株のMCP遺伝子を普遍的に特異的に増幅するプライマーを設定した。さらに濾紙に染み込ませた乾燥血液が、PCR法の検体試料として利用できうることを明らかにした。これまでに得られたPCMV主要遺伝子の分子系統樹解析の結果、PCMVはベータヘルペスウイルス亜科、特に人ヘルペスウイルス6型及び7型のグループに属することを確定した。
本研究の成果は、細胞性・液性免疫の誘導や組み換えワクチン作成に関する基礎的な情報を提供し、また特異性の高いPCR法を確立したことで、短時間でPCMV感染の有無を判定することが可能になった。今後、獣医微生物学および豚の臓器を利用した異種移植に関する臨床研究の分野の発展に大きく貢献するものと考えられる。

研究成果

• [文献書誌] Rupasinghe, V.: "Identification of the porcine cytomegalovirus capsid protein gene"J. Vet. Med. Sci.. 63. 609-618 (2001)
• [文献書誌] Horimoto, T.: "Capsid protein gene variation among Japanese isolates of feline calicivirus"Virus Genes. 23. 171-174 (2001)
• [文献書誌] Horimoto, T.: "Pandemic threat posed by avian influenza A viruses"Clinical Microbiol. Rev.. 14. 129-149 (2001)
• [文献書誌] Kato, K.: "Identification and characterization of Marek's disease virus serotype 1(MDV1) ICP22 gene product : MDV1 ICP22 transactivates the MDV1 ICP27 promoter synergistically with MDV1 ICP4"Vet. Microbiol. 85. 305-313 (2002)
• [文献書誌] Kato, K.: "Epstein-Barr virus-encoded protein kinase BGLF4 mediates hyperphospho rylation of cellular elongation factor 1delta(EF-1delta) : EF-1delta is universally modified by conserved protein kinases of herpesviruses in mammalian cells"J. Gen. Virol. 82. 1457-1463 (2001)
• [文献書誌] Kawaguchi, Y.: "Herpes simplex virus 1 alpha regulatory protein ICPO functionally interacts with cellular transcription factor BMAL1"Proc. Natl. Acad. Sci. USA.. 98. 1877-1882 (2001)