| 研究課題/領域番号 |
10556073
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 展開研究 |
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| 研究分野 |
応用獣医学
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| 研究機関 | 東京大学 (2000-2001)
大阪府立大学 (1998-1999) |
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研究代表者 |
堀本 泰介 東京大学, 医科学研究所, 助教授 (00222282)
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| 研究分担者 |
前田 健 山口大学, 農学部, 助教授 (90284273)
川口 寧 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 助教授 (60292984)
杉井 俊二 大阪府立大学, 大学院・農学生命科学研究科, 教授 (70162865)
土屋 耕太郎 日本生物科学研究所, 研究部, 主任研究員 (70207405)
五藤 秀男 東京大学, 医科学研究所, 助手 (50323639)
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| 研究期間 (年度) |
1998 – 2001
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| キーワード | ブタサイトメガロウイルス / ベータヘルペスウイルス / ウイルスベクター / DNAポリメラーゼ / カプシッド蛋白質 / 糖蛋白質 / ワクチン |
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| 研究概要 |
ブタ用多価組み換えウイルス生ワクチンを開発するためには、まずベクターウイルスの選択を検討しなければならない。この目的に合うベクターウイルスとしては、(1)ブタに感染するが病原性の弱いもの、あるいは確実に弱毒化されているもの、(2)比較的サイズの大きな複数の外来性の遺伝子の挿入が可能なもの、(3)外来抗原を長期間発現可能な持続感染性のもの、が理想的であると考えられる。本研究では、この条件に合うものとしてブタサイトメガロウイルス(Porcine Cytomegalovirus : PCMV)のベクター化を考えた。その基礎知見の獲得のため、PCMVのゲノム構造および主要蛋白質の性状解析を実施し、以下の研究成果を得た。(1)PCMVゲノムDNAの制限酵素切断プロファイルを明かにし、切断断片のクローニングに成功した。(2)ヘルペスウイルスの主要遺伝子である主要ゲノムの転写複製に必須であるDNAポリメラーゼ遺伝子、粒子形成に必須であるカプシッド蛋白遺伝子、細胞レセプターへの結合に関与する糖蛋白質gB遺伝子、およびこれら周辺の遺伝子クラスターの同定、塩基配列を決定した。(3)これら主要遺伝子の分子系統解析の結果、PCMVはベータヘルペスウイルス亜科、特にヒトヘルペスウイルス6型および7型と非常に近縁なウイルスであることを発見した。(4)いくつかの必須遺伝子の発現実験により蛋白質の分子構造解析、あるいは免疫性状などについて検討した。(5)PCMV感染の有無を判定する高感度で特異性の高いMCP遺伝子配列に基づくPCR法を確立した。さらに、濾紙乾燥血液をこの方法に応用した。これらの成果は、細胞性・液性免疫の誘導や組み換えワクチン作製に関する基礎的な情報を提供するのみならず、今後、獣医畜産学および豚の臓器を利用した異種移植に関する臨床医学の発展に大きく貢献するものと考えられる。
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