法医学的検査に適した新しいマイクロサテライト座の選択と汎用性の確立

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10557046
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 勝又 義直 名古屋大学, 医学部, 教授 (30109326)
• 研究分担者: 打樋 利英子 名古屋大学, 医学部, 助手 (20223571) ; 山本 敏充 名古屋大学, 医学部, 助教授 (50260592)
• キーワード: マイクロサテライト / STR / キャピラリー電気泳動 / 蛍光標識プライマー / ヘテロ接合度

研究概要

本研究の初年度においては、市販の連鎖解析用STRセットで、ほぼ25センチモルガン毎にヒトゲノム中に存在している168ローカスをタイピングできるMap Pair 8A(Research Genetics)を用いて分析した。このキットでは3色の蛍光色素(FAM、HEX、TET)のいずれかで片方のプライマーの標識によりキャピラリー電気泳動し、Version 8A multiplex表に従って複数のローカスを同時に増幅し、ABI310 Gene Scan Analysisソフトウエを用いてアsizingすることで型判定を行った。日本人32人のDNA資料のタイピング結果から、それぞれのアリル頻度、ヘテロ接合度等を計算した。現在までに約80ローカスの分析を終えているが、ヘテロ接合度が0.8を越えるローカスが10以上見出されている。今後は、さらにスクリーニングを進めつつ、法医学的検査に適したローカスを絞り込む作業を行う。これらの市販のSTRセットのほか、ノッチンガム大学のアーマー教授が発見したマイクロサテライト群からも不規則アリルがなく、ヘテロ接合度の比較的高い3ローカス(Wg1 c5、wg1d1、9q2h2)を選定し、日本人頻度を調査すると共に代表的アリルのシークエンス分析を行い、アレリックラダーを作成した。このアレリックラダーを用いた正確な型判定法の法医学的有用性について検討した。その結果、これら3ローカスはいずれもヘテロ接合度が0.7を大きく越え、不規則アリルもなく、判定が容易で法医学応用に適しているとわかった。

研究成果

• [文献書誌] T.Yamamoto: "Polymorphism analysis of nine STR loci in Japanese using multiplex PCR and capillary electrophoresis" Progress in Forensic Genetics. 7. 390-391 (1998)
• [文献書誌] T.Yamamoto: "Maternal identification from skeletal remains of an infart kept by the alleged mother for 16 years with DNA typing" J.Forensic Sciences. 43(3). 701-705 (1998)
• [文献書誌] T.Yamamoto: "Allele distribution at nine STR loci-D3S1358,vWA,FGA,TH01,TPOX,CSF1PO,D5S818,D13S317 and D7S820-in the Japanese population by multiplex PCR and capillary electrophorresis." J.Forensic Sciences. 44(1). 167-170 (1999)
• [文献書誌] Y.Kato: "Large-scale preparation of high-molecular weigt DNA from buccal mucosa." Legal Medicine. (in press).
• [文献書誌] M.Mizutani: "Evaluation of two new STR loci 9q2h2 and wg3f12 in a Japanese population." Legal Medicine. (in press).
• [文献書誌] T.Yoshimoto: "Sequence analysis of alleles at a microsatellite locus D14S299(wg1c5)and population genetic comparisons." International J.Legal Medicine. (in press).