法医学的検査に適した新しいマイクロサテライト座の選択と汎用性の確立

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10557046
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 勝又 義直 名古屋大学, 医学部, 教授 (30109326)
• 研究分担者: 打樋 利英子 名古屋大学, 医学部, 助手 (20223571) ; 山本 敏充 名古屋大学, 医学部, 助教授 (50260592)
• キーワード: マイクロサテライト / STR / キャピラリー電気泳動 / 蛍光標識プライマー / アリル頻度 / ヘテロ接合度

研究概要

初年度に引き続いて、今年度も市販の連鎖解析用STRセットで、ヒトゲノム中にほぼ25cM毎に存在している168ローカスをタイピングできるMapPair8Aを用いて分析した。このキットでは、3色の蛍光色素がいずれか片方のプライマーに標識されており、Version8A mu1tip1ex表に従って複数のローカスをPCR増幅し、増幅産物をABI Genetic Analyzer310を用いてキャピラリー電気泳動し、sizingすることで型判定を行った。日本人32名のDNA資料のタイピング結果から、それぞれのアリル頻度、ヘテロ接合度等を計算した。今年度は、全てのローカスの分析を終え、ヘテロ接合度が0.8を越えるローカスを約20選び出し、GDBなどのデータベースから得られた塩基配列をもとに、繰り返し領域の構造が比較的単純なものを12ローカス選び出した。それらのローカスについて、塩基配列を正確に決定した。
この12ローカスについて、3色の蛍光標識色素を用いるマルチプレックスシステムの作成を試みた。正確で容易な型判定を目指し、6つのローカスを一度にタイピングできる2つのシステムを作成した。それぞれ各ローカスのプライマー設計を工夫し、1つのシステムは完成した。もう1つのシステムも一部のプライマー設計の調整を残してほぼ完成している。この市販のSTRプライマーセットのほか、ノッチンガム大学のアーマー教授が発見したマイクロサテライト群からも不規則アリルがなく、ヘテロ接合度の比較的高い3ローカス(wg1c5,wg1d1,9q2h2)を選定し、マルチプレックスシステムを作成し、その法医学的有用性について日本DNA多型学会第8回学術集会で発表した。このように、日本人の法医学的検査に適した合計15のローカスを用いたマイクロサテライトタイピングシステムをほぼ完成することができた。

研究成果

• [文献書誌] T.Yamamoto: "Allele distribution at nine STR loci-D3S1358, vWA, FGA, TH01, TPOX, CSF1PO, D5S818, D13S317 and D7S820-in the Japanese population by multiplex PCR and capillary electrophoresis"J. Forensic Sciences. 44(1). 167-170 (1999)
• [文献書誌] Y. Kato: "Large-scale preparation of high-molecular weight DNA from buccal mucosa"Legal Medicine. 1(1). 6-10 (1999)
• [文献書誌] M. Mizutani: "Evaluation of two new STR loci 9q2h2 and wg3f12 in a Japanese population"Legal Medicine. 1(1). 25-28 (1999)
• [文献書誌] T. Kojima: "Tetrameric short tandem repeat (STR) system D15S233 (wg1d1): Sequencing and frequency data in the Japanese and Chinese populations"Legal Medicine. 1(3). 119-126 (1999)
• [文献書誌] T. Yoshimoto: "Sequence analysis of alleles at a microsatellite locus D14S299 (wg1c5) and population genetic comparisons"International J. Legal Medicine. 113(1). 15-18 (1999)
• [文献書誌] 勝又義直: "日本人集団におけるハーディ・ワインベルグ平衡の検定法について"日本法医学雑誌. 53(2). 217-226 (1999)