造血細胞における、外来遺伝子の導入効率・発現効率の向上を目指した手法の開発

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10557091
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 伊藤 克彦 京都大学, 医学研究科, 講師 (90281097)
• 研究分担者: 森田 慶子 (西村 慶子) 日本たばこ産業株式会社, 医薬探索研究所, 研究員 ; 辻 孝 日本たばこ産業株式会社, 医薬探索研究所, 主任研究員 ; 東辻 宏明 京都大学, 医学研究科, 助手 (60281094) ; 藤田 潤 京都大学, 医学研究科, 教授 (50173430)
• キーワード: レトロウイルス / 造血幹細胞 / シュードタイプ・ウイルス / GALV / VSV G蛋白

研究概要

平成10年度の本研究では、ヒト造血幹細胞への遺伝子導入効率をあげ、発現効率を向上させる、レトロウイノルス・ベクターを用いた手法の開発を目指し、以下のことをおこなった。1。ストローマ細胞を用いた、アンフォトロピック・パッケージング細胞株、および、シュードタイプ・パッケージング細胞株の樹立2。アンフォトロピック・ウイルスベクター産生細胞の作成3。各種のヒト造血細胞株でのマーカー遺伝子発現効率の比較検討以上のことから、次のような結果を得た。1。効率良い遺伝子導入を行うため、VSVG蛋白とシュードタイプ・ウイルスを作成することの有用性が確認できた。しかし、ストローマ細胞由来のパッケージング細胞では、NH/3T3胞由来のパッケージング細胞に比べて、安定したウイルス産生クローンを得るのが困難であることが、確認された。現在、 GA-V(Gbon Ape Leukemia Virus)のenvを用いた、シュードタイプ・パッケージング細胞の樹立を試みている。2。既存のNH/3T3細胞由来のパッケージング細胞株を用いて、種々のレトロウィルスベクターのアンフォトロピック・ウイルスベクター産生クローンを樹立した。。3。種々のレトロウイルスベクターのアンフォトロピック・ウイルスベクターを種々の造血細胞株に遺伝子導入し、遺伝子の発現を比較検討した。SFFVpのU3領域とMESVのleader領域を持つPMEVタイプのレトロウイルスベクターが、ヒトの幼若な造血細胞株において、最も強い発現をもたらすことが見いだされた。

研究成果

• [文献書誌] Nishiyama H et al.: "Decreased expression of cold-induced RNA-binding protein(CIRP)in male germ cells at elerated temperature" Am.J.Path.152. 289-296 (1998)
• [文献書誌] O'Prey J et al.: "Signalling mechanisms involved in long-Term growth of ELM erythroleukeunig cells" Blood. 91. 1548-1555 (1998)
• [文献書誌] Xue J H et al.: "Induction of apq-1, a member of the heat shock protein 11.0 family, following transient fore brain ischemia in the rat brain" Biochem.Biophys.Res.Commum.247. 796-801 (1998)
• [文献書誌] Tatsumi K et al.: "Expression of calcium binding protein D-9K messenger RNA in the mouse uterine endometrium during implantation" Mol.Human Reprod.5. 153-161 (1999)
• [文献書誌] Tsuji T et al.: "A murine strounal cell line promotes the expansion of CD34 hight primitive progenitor cells isdated from human unbilical cord blood in the combination with human cytokines" Growth Factors. (in press). (1999)
• [文献書誌] Kawada H et al.: "Short-Term ex vivo expansion of human umnbilical cord blood hematopoietic progenitor cells using a novel culture system" Exp.Hematol.(in press). (1999)