| 研究課題/領域番号 |
10557096
|
|---|
| 研究機関 | 徳島大学 |
|---|
研究代表者 |
武田 英二 徳島大学, 医学部, 教授 (00144973)
|
|---|
| 研究分担者 |
山本 浩範 徳島大学, 医学部, 助手 (60314861)
森田 恭子 徳島大学, 医学部, 助手 (40244777)
宮本 賢一 徳島大学, 医学部, 教授 (70174208)
|
|---|
| キーワード | フォスファトニン / Na依存性リン輸送担体 / スタニオカルシン2 / 遺伝性低リン血症 / 腫瘍性低リン血性骨軟化症 |
|---|
| 研究概要 |
腎尿細管のリン再吸収を行うナトリウム依存性リン(Na/Pi)輸送担体のリン輸送活性を抑制し、活性型ビタミンD(1,25(OH)2D3)合成を阻害する新しいリン代謝調節液性因子(フォスファトニン)の存在が示唆されている。ヒトII型NaPi-3遺伝子のプロモーター下にルシフェラーゼ遺伝子を発現する腎近位尿細管細胞OK-B2400を樹立して、遺伝性低リン血症患者血清中にフォスファトニンを検出するとともにリン輸送活性を抑制するスタニオカルシン2(STC2)遺伝子をクローニングした。
1)フォスファトニンの同定:マウスII型NaPi-7遺伝子プロモーターをクローニングし、フォスファトニンを高感度に検出するシステムを確立した。これを用いてフォスファトニンを発現している培養リンパ球株を大量培養して精製を行っている。しかし、微量であることと精製の過程で失活することから精製は困難を極めている。
2)STC2の機能解析:STC2遺伝子を発現させたCHO細胞のメディウムはNPT2遺伝子のプロモーター活性およびOK細胞のリン輸送活性を抑制した。大腸菌にSTC2遺伝子を組み込んでGSTとの融合STC2蛋白として大量発現し、アフィニティーカラムを用いて溶出し、酵素処理により単一のSTC2を得た。STC2はNPT2遺伝子のプロモーター活性およびOK細胞のリン輸送活性を抑制した。さらに、STC2の発現はHypマウスおよび腫瘍性低リン血症腫瘍組織では低下していることが明らかになった。
|
