研究課題
基盤研究(B)
レーザー照射装置の試作;YAGレーザーを光源とするパルスレーザー照射装置と、やはりYAGレーザーを光源とするレーザートラッピング装置を同一顕微鏡に装着した。その際に無菌操作が可能となるよう、これまで用いていた正立の顕微鏡ではなく、倒立顕微鏡で操作が可能になるようにレーザー装置を改良した。加えて、細胞やプラスミドをトラッピングするための微小位置決め装置(マニュピュレーター)、および画像処理装置(CCDカメラ)も本システムに組み込みシステムを完成させた。操作性の検討;このレーザー装置を用いて、ラテックス球などの微小物体を用いた模擬実験により本装置のトラッピング効果の基本的特性(パルスの出力、波長、照射時間、角度など)を詳しく解析した。加えて、リンパ球を用いて同様の実験を行い、生体に影響を及ぼさないトッラッピング・レーザーの波長、出力の検討を行った。細胞融合実験;リンパ球を用いて、細胞融合のレーザー照射の条件(接触面積、照射角度、レーザーの出力)を検討し、細胞融合に成功した。つぎにリンパ球とミエローマ細胞との細胞融合実験を行い、HAT selsctionにて融合細胞の性質検査を行った。その結果、リンパ球とミエローマ細胞の両方の正確を持つハイブリドーマが作成され、クローニングにも成功した。現在この細胞の増殖性、機能性を検討中である。今後は、遺伝子導入のための試作装置の最適操作法の確立のためにプラスミドを培地に添加したリンパ球細胞にパルスレーザーを照射し、遺伝子導入実験ならびにその遺伝子発現の検索を行う予定である。
