| 研究課題/領域番号 |
10557221
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| 研究機関 | 金沢大学 |
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研究代表者 |
大熊 勝治 金沢大学, 大学院・自然科学研究科, 教授 (10119563)
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| 研究分担者 |
染井 正徳 金沢大学, 薬学部, 教授 (20110546)
横山 謙 金沢大学, 薬学部, 助手 (70271377)
荒井 國三 金沢大学, 薬学部, 講師 (50126562)
畑中 保丸 富山医科薬科大学, 薬学部, 教授 (30111181)
太田 哲生 金沢大学, 医学部・附属病院, 助教授 (09671290)
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| キーワード | バフィロマイシン / プロトンポンプ / PC12 / アポトーシス / 突起伸展(NOG) / プロジギオシン / 細胞分化 / コンカナマイシン |
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| 研究概要 |
本研究でば,バフィロマイシン類やプロジギオシン類等の空胞系プロトンポンプを阻害する物質による,細胞の増殖阻害、分化・アポトーシス誘の導機構等を明らかにするともに、細胞増殖阻害と分化・死誘導に必須な構造、並びにプロトン輸送阻害機構の解明を目指している。
バフィロマイシン類は神経突起伸展(NOG)とともにアポトーシスを誘導するが、情報伝達経路は両反応で異なっていることが判明した。則ち、両反応とも新たなRNA及び蛋白質合成、MAPキナーゼ/セリンフォスファターゼやチロシンキナーゼに依存性で、K-252a、A-キナーゼ等に非依存性であるが、チロシンホスファターゼ、アラキドン酸カスケ-ド、カルモジュリンキナーゼ等に非依存性である点で、アポトーシス誘導はNOG誘導と異なっていた。しかし、各種のH+/Cl-シンポーターも増殖阻害、NOGやアポトーシス誘導作用を示すが、一律にH+/Cl-シンポート活性では説明出来なかった。また、V-ATPase阻害剤によるPC12細胞のNOG、アポトーシス誘導、細胞増殖阻害活性等にpHは関係していないことを見い出した。また、プロジギオシン類(H+/Cl-シンポーター)もヌードマウスに移植した癌細胞の増殖を抑制するが、バフィロマイシン類は移植血管細胞の増殖をも阻害することを発見した。このことは、動脈硬化発現にプロトン・ポンプが関係していることを示唆している。
一方、真性細菌である高度好熱菌V-ATPaseの遺伝子を確定することが出来た。operon構造を取っているので研究しやすいので、今後、この系を使ってV-ATPaseのプロトン輸送機構等を明らかにしたいと考えている。
プロトン・ポンプ阻害活性のある「コンカナマイシン結合フォトアフィニティープローブ」の作成に成功した。従って、コンカナマイシン結合タンパク質の同定が可能になった。今後、同じ原理で、「コンカナマイシン結合アクリルアミド結合体」等を合成し細胞内に入らないことを確認出来たら、細胞膜に作用することによってこのような効果が出るのかを確認したい。
なお、プロジギオシン類はブタ胃粘膜の(H^+-K^+)ATPaeのプロトン・ポンプ活性をも可逆的に阻害することを発見している。
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