| 研究課題/領域番号 |
10557230
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 展開研究 |
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| 研究分野 |
医薬分子機能学
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
杉山 雄一 東京大学, 大学院・薬学系研究科, 教授 (80090471)
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| 研究分担者 |
滝川 一 帝京大学, 医学部, 助教授 (70197226)
加藤 将夫 東京大学, 大学院・薬学系研究科, 助手 (30251440)
鈴木 洋史 東京大学, 大学院・薬学系研究科, 助教授 (80206523)
加藤 基浩 中外製薬株式会社, 薬物動態研究所, 研究主査(研究職)
中村 敏一 大阪大学, 医学部, 教授 (00049397)
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| 研究期間 (年度) |
1998 – 1999
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| キーワード | 細胞内挙動 / ドラックデリバリーシステム / 生理活性蛋白質 / レセプター / エンドサイトーシス |
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| 研究概要 |
肝細胞増殖因子の血中安定性の向上と治療効果の改善を目的とした遺伝子組換え技術による細胞内挙動制御を試みた。HGFはヘテロな2本鎖からなる蛋白質であるがそれらが相補的に働くことによってレセプターを介したシグナル伝達の起こることが明かとなった。しかしレセプター結合部位自身はN末端に近い部分に存在することからC末端側に小胞体ならびに核移行シグナルを導入しCOS-7細胞にて発現させ組換え蛋白質を回収した。得られたリガンドを放射標識し、細胞内挙動を検討したところ、レセプターへの結合や内在化に関してはwild-typeHGFとほとんど同じである一方、リソゾームでの分解は組換え体で大きく低下し、本手法によって細胞内挙動を制御することが可能であることが明かとなった。ラット初代培養肝細胞系に添加後の安定性を検討したところ、wild-typeと比較し若干の安定性が確認されたが劇的なものではなかった。従って、リソゾームでの分解を回避したリガンドを再度表面にリサイクルさせる過程にさらなるdeviceが必要であることが示唆された。そこで、エシトソーム内でのレセプターからの解離が、その後のリガンドの運命(代謝もしくはリサイクル)を決めるという仮説に基づき、上皮成長因子とTGF-alphaの細胞内挙動を比較したところ、細胞内pHで解離のしやすい後者の方がリサイクルされる割合の大きいことが示唆され、今後このアプローチを組み合わせることによって、安定な蛋白質製剤の確立がなされるものと考えられた。同様な手法の一般的な応用性を明かにする目的でエリスロポエチンについても検討を開始する目的で、その体内動態機構の解析にも着手し、レセプターup-regulationのメカニズムが、標的細胞のmigrationと増殖によることを明かとした。
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