1999 年度実績報告書

情報伝達機能分子の細胞内動態の画像化とレーザー高分子活性化法による解析技術開発

研究課題

研究課題/領域番号	10558112
研究機関	東京大学
研究代表者	御子柴克彦東京大学, 医科学研究所, 教授 (30051840)
キーワード	IP_3 / IP_3受容体 / マイクロCALI / レーザー / GFP / 神経成長円錐 / 小胞体
研究概要	これまでは、ある分子の生命内での機能を調べる場合トランジェニックスマウス固体を作成し、過剰発現をさせたり、叉は、ノックアウトマウスによる過剰発現かアンチセンスでの解析が可能であった。しかしこれらの方法は必ずしも万能でない。今回は、物理化学的な手法として、レーザー光線を利用し、特異性を出すために、特異抗体を利用して、特異的に標的である抗原分子を破壊する方法を導入することにより特定の機能分子の生体内での役割解明に従事した。細胞内の一部に照射する方法のみならず、ビックレーザーを利用して、高エネルギーのレーザー光を利用して、組織レベルでの解析もおこなった。抗体と色素のコンジュゲート技術の簡便化を行いルーティン化する。レーザー光操作システムの簡便化をすすめ、また、IP_3受容体のタイプ1型については解析を行ったので、タイプ3型について本法を神経成長円錐へ応用して解析。マイクロCALIでは、1〜2μm位の小さなスポットでの不活性化しかできないため、より高いエネルギーのCALIを組み立てて、細胞の機能分子を不活性化させる技術開発を試みた。また、光源のスポットの均一性、スポットの形状の調査をおこない、最適条件発見に何らかの可能性を見出した。我々はGFP(green-flourescence-protein)に注目してみた。この蛋白質は何らconfactorを必要とせずに、励起によって蛍光を発する。これをコードする遺伝子は既にとられ、遺伝子工学的手法を用いてGFPを他の蛋白質分子に融合して細胞内で発現することが可能になった。まず技術の開発の為に小胞体カルシウムポンプ(SERCA)にGFPをつけ、その細胞内動態を細胞分裂時について解析を行った。

研究成果

(17件)

すべてその他

すべて文献書誌 (17件)

[文献書誌] Yoshikawa,F.et al.: "Cooperative formation of the ligand-binding site of the inositol"J.Biol.Chem.. 274. 328-334 (1999)
[文献書誌] Yoshikawa,F.et al.: "Trypsinized cerebellar inositol 1,4,5-trisphosphate receptor"J.Biol.Chem.. 274. 316-327 (1999)
[文献書誌] Zhu,C.et al.: "Inosiotl 1,4,5-trisphosphate receptor dpwn-regulation is activated"J.Biol.Chem.. 274. 3476-3484 (1999)
[文献書誌] Yoshikawa,F.et al.: "High efficient expression of the functional ligand binding site of the"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 257. 792-797 (1999)
[文献書誌] Konishi,Y et al.: "Transcriptional regulation of mouse type 1 inositol 1,4,5-trisphospphate"J.Neurochem.. 72. 1717-1724 (1999)
[文献書誌] Ohkawa,N:et al: "Activation of the mouse inositol 1,4,5-trisphosphate receptor type 1"Gene. 229. 11-19 (1999)
[文献書誌] Hamada,T.et al.: "The role of inositol trisphosphate-induced Ca2+ release from IP3-"Neurosience Letters. 263. 125-128 (1999)
[文献書誌] Natsume,T.et al.: "Real time analysis of interaction between inositol 1,4,5-trisphosphate"BIochem.Biophys.Res.Commun.. 260. 527-533 (1999)
[文献書誌] Michikawa,T.et al.: "Calmodulin mediates calcium-dependent inactivation of the cerebellar"Neuron. 23. 799-808 (1999)
[文献書誌] Hiirota,J.et al.: "Calmodelin inhibits inositol 1,4,5-trisphosphate-induced calcium"FEBS Letters. 456. 322-326 (1999)
[文献書誌] Nagata,E.et al.: "Selective inhibition of inostitol 1,4,5-trisphosphate-induced Ca2+"Neuroscience. 93. 995-1001 (1999)
[文献書誌] Mitsuyama,F.et al.: "Microinjection of Ca2+ store-enriched microsome fractions to diving"Developmental Biology. 214. 160-167 (1999)
[文献書誌] Hayashi,M.et al.: "Intracelluar calsium concentration in the inositol trisphosphate"J.Am.Soc.Nephrol.. 10. 2094-2101 (1999)
[文献書誌] Boulay,G,et al.: "Modulation of Ca2+ entry by polypeptides of the IP3...."Proc.Natle.Acad.Sci.USA. 96. 14955-14960 (1999)
[文献書誌] Hirota,J et al.: "Inositol 1,4,5-trisphsphate type 1 is a substate for caspase-3"J.Biol.Chem.. 274. 34430-34437 (1999)
[文献書誌] Baylis,H.A.,et al.: "Inositol1,4,5-trisphosphate receptors are strongly expressed"J.Mol.Biol.. 294. 467-476 (1999)
[文献書誌] Sugiyama,T.et al.: "Inositol 1,4,5-trisphophate receptor associated with focal"FEBS Letters. 466. 29-34 (2000)

1999 年度 実績報告書

情報伝達機能分子の細胞内動態の画像化とレーザー高分子活性化法による解析技術開発

研究代表者

御子柴 克彦 東京大学, 医科学研究所, 教授 (30051840)

研究成果

[文献書誌] Yoshikawa,F.et al.: "Cooperative formation of the ligand-binding site of the inositol"J.Biol.Chem.. 274. 328-334 (1999)

[文献書誌] Yoshikawa,F.et al.: "Trypsinized cerebellar inositol 1,4,5-trisphosphate receptor"J.Biol.Chem.. 274. 316-327 (1999)

[文献書誌] Zhu,C.et al.: "Inosiotl 1,4,5-trisphosphate receptor dpwn-regulation is activated"J.Biol.Chem.. 274. 3476-3484 (1999)

[文献書誌] Yoshikawa,F.et al.: "High efficient expression of the functional ligand binding site of the"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 257. 792-797 (1999)

[文献書誌] Konishi,Y et al.: "Transcriptional regulation of mouse type 1 inositol 1,4,5-trisphospphate"J.Neurochem.. 72. 1717-1724 (1999)

[文献書誌] Ohkawa,N:et al: "Activation of the mouse inositol 1,4,5-trisphosphate receptor type 1"Gene. 229. 11-19 (1999)

[文献書誌] Hamada,T.et al.: "The role of inositol trisphosphate-induced Ca2+ release from IP3-"Neurosience Letters. 263. 125-128 (1999)

[文献書誌] Natsume,T.et al.: "Real time analysis of interaction between inositol 1,4,5-trisphosphate"BIochem.Biophys.Res.Commun.. 260. 527-533 (1999)

[文献書誌] Michikawa,T.et al.: "Calmodulin mediates calcium-dependent inactivation of the cerebellar"Neuron. 23. 799-808 (1999)

[文献書誌] Hiirota,J.et al.: "Calmodelin inhibits inositol 1,4,5-trisphosphate-induced calcium"FEBS Letters. 456. 322-326 (1999)

[文献書誌] Nagata,E.et al.: "Selective inhibition of inostitol 1,4,5-trisphosphate-induced Ca2+"Neuroscience. 93. 995-1001 (1999)

[文献書誌] Mitsuyama,F.et al.: "Microinjection of Ca2+ store-enriched microsome fractions to diving"Developmental Biology. 214. 160-167 (1999)

[文献書誌] Hayashi,M.et al.: "Intracelluar calsium concentration in the inositol trisphosphate"J.Am.Soc.Nephrol.. 10. 2094-2101 (1999)

[文献書誌] Boulay,G,et al.: "Modulation of Ca2+ entry by polypeptides of the IP3...."Proc.Natle.Acad.Sci.USA. 96. 14955-14960 (1999)

[文献書誌] Hirota,J et al.: "Inositol 1,4,5-trisphsphate type 1 is a substate for caspase-3"J.Biol.Chem.. 274. 34430-34437 (1999)

[文献書誌] Baylis,H.A.,et al.: "Inositol1,4,5-trisphosphate receptors are strongly expressed"J.Mol.Biol.. 294. 467-476 (1999)

[文献書誌] Sugiyama,T.et al.: "Inositol 1,4,5-trisphophate receptor associated with focal"FEBS Letters. 466. 29-34 (2000)

1999 年度実績報告書

御子柴克彦東京大学, 医科学研究所, 教授 (30051840)