| 研究課題/領域番号 |
10558138
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| 研究機関 | 東京慈恵会医科大学 |
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研究代表者 |
永森 静志 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助教授 (60119831)
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| 研究分担者 |
加藤 尚志 キリンビール株式会社, 医薬探索研究所, 主任研究員
松浦 知和 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (30199749)
蓮村 哲 東京慈恵会医科大学, 医学部, 講師 (30189518)
大上 欽也 キリンビール株式会社, 医薬探索研究所, 研究員
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| キーワード | ヒト由来 / 肝細胞 / 人工肝臓 / ラジアルフロー / バイオリアクター / 肝由来蛋白 |
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| 研究概要 |
30mlタイプのリアクターは200mlタイプと比較したところ単位容量あたりの酸素消費量、グルコース消費量はほぼ一致し、本来のラジアルフロー型培機能を発現していることが確認できた。5mlリアクターについては、これを用いての培養は可能で一部の代謝実験等は可能になっている。しかしリアクター内での細胞分布にばらつきが出るなどさらに改良の余地がある。
担体については粒子径0.6mm、空隙率50%、孔径200μmのヒドロキシアパタイト多孔質ビーズを作成した。FLC細胞を培養したところシランに劣らない培養が可能で、光学顕微鏡や電子顕微鏡で、高密度に3次元的に配列していることが観察された。さらに機能面での機能の評価を予定している。
肝特異蛋白のアルブミンやTPOに関しては申請者らの開発した高感度ELISA法により、培養液中の産生量を測定した。本システムでの産生効率はアルブミンでは、単層培養における6から7倍。TPOについては培養液中にヒト血清中と同程度の濃度で産生され従来の培養装置に比べ効率の高い培養が可能である事が証明された。リアクターでヒト肝由来細胞が産生したTPOを精製し、アミノ酸配列や糖鎖などの生化学的検討を行い活性との関係を解析中である。
細胞株については他施設と協同研究で樹立したFLC細胞のクローニング株やヒト不死化肝細胞が本システムに応用可能な状況となった。
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