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本年度はリンゴクロロティックリーフスポットウイルス(ACLSV)の感染性cDNAクローン(pCLSF)のパーティクルガンを用いた植物体への接種およびpCLSFへのグリーン蛍光タンパク質(GFP)遺伝子の導入を行い、以下のような結果を得た。
(1) パーティクルガンを用いてpCLSFを、ACLSVの宿主植物であるNicotiana occi dentalisおよびChenopodium quinoaに効率的に接種できる条件を検討し、100%の感染を得ることができた。
(2) pCLSF内の移行タンパク質(MP)遺伝子および外被タンパク質(CP)遺伝子とGFP遺伝子を交換したクローン(pCLSF△MP-GFPおよびpCLSF△CP-GFP)を構築した。
(3) pCLSF△MP-GFPおよびpCLSF△CP-GFPをパーティクルガンで宿主植物の葉に導入し、ウイルスの増殖と細胞間移行を蛍光顕微鏡を用いて経時的に観察した結果、単一細胞のみでGFPの蛍光が観察され、MPとCPの両遺伝子がACLSVの細胞間移行に必要であることが明らかになった。
(4) 当初の目的であったpCLSFにGFPを連結したクローン(pCLSF一GFP)の構築は現在進行中である。
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