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Medタンパク質のComK制御における役割を明らかにするためにキシロース誘導性プロモーター支配下にcomK遺伝子を置き、さらにcomK-lacZ融合体を染色体に持つ枯草菌を構築した。この株にmed磁壊変異を導入しキシロース添加条件でのcomK遺伝子発現を解析した。
MedがComKにタンパク質相互作用で作用するならキシロース添加でcomK現を誘導してもmed破壊のためcomK発現はそれ以上増加しない。MedがcomK転写に作用するならキシロース添加はmed破壊の効果を打ち消す事が期待される。実験の結果Medは明らかにcomKに転写の段階で作用していた。Medアミノ酸配列からMedが脂質修飾を受ける可能性が示唆されたのでMedの細胞内局在化について調べるため、MedのN-末端疎水性部とその直後のシステインを含む脂質修飾コンセンサス配列下流でアルカリフォスファターゼ遺伝子と結合したfusionを作り、主要な内在性アルカリフォスファターゼ遺伝子を欠損させた枯草菌に導入して解析した。その結果Medシグナル配列と融合したアルカリフォスファターゼの活性が培地及びプロトプラスト双方で観察された。またタンパク質脂質修飾の第一段階の反応を触媒する酵素の遺伝子lgt破壊株でもほぼ同様な結果を得た。lgt破壊株では脂質修飾は起こらずMed-APは細胞膜表面には発現しないはずであるが、最近、グラム陽性菌ではlgt株でpreリポタンパク質が脂質修飾もシグナル配列切断もされずに細胞膜を通過し培地に表れると言う報告がなされた。また、この報告によれば、グラム陽性菌ではリポタンパク質は細胞膜から外れ培地に表れる割合が高い。Medの実験結果についてもおそらく同様な解釈が可能であると考えられる。さらに抗体を用いた解析を行うため、Medタンパク質のC-末端ペプチドを合成し抗体を作製した。次年度に詳しくMedのprocessingと局在について解析する予定である。
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