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ビーグル犬の脳内加齢性諸変化、特にフリーラジカルによる傷害が原因と考えられている神経細胞のアポトーシスとメタロチオネイン(以下、MT)との関連性を明らかにする目的で、加齢性諸変化(β-アミロイド沈着、神経細胞のアポトーシス・変性・脱落、アストロサイトの増生、リポフスチン色素沈着、軸索ディストロフィー、金属蓄積)の分布を検索し、特定のMTイソ蛋白mRNAの発現・分布パターンとを比較した。その結果、以下の所見が確認された。
a. 形態学的加齢性諸変化の確認
HE染色、各種特殊染色(銀染色、鉄染色)、免疫組織化学的検索により、8才からすでに、加齢性諸変化(神経細胞脱落、グリオーシス、軸索ディストロフィー等)が生じている。
b. 神経細胞のアポトーシスの確認
In situアポトーシス検出用キットにより、組織標本上でのアポトーシスを確認した。
c. MTl-およびMTIII-mRNAの発現・分布パターンおよびそのパターンの加齢に伴う変化を明らかにする目的で、ジゴキシゲニン-11-dUTP標識RNAプローブを用いてノーザンブロッティング並びにIn situハイブリダイゼーションを実施したところ、MTIは加齢に伴い発現が増強したが、MTIIIは年齢に関わらず一定の発現を示し。
d. 加齢に伴う金属の脳内蓄積の有無の確認
嗅球、海馬、視床を含む脳内各部位における金属の定量的分析(誘導結合プラズマ発光分析法:)および組織化学的検索(鉄染色)により、鉄および銅が加齢に伴い脳内に蓄積することが確認された.
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