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自然界では低栄養下の細菌が代謝活性はあっても分裂できない(VBNC)状態になることがある。この現象は、ナリジク酸の感受性を利用してグラム陽性菌で知られてきたが、グラム腸性菌のそれについての知見は乏しかった。昨年著者は抗生物質としてレボフロキサシンを用いてVBNC化したListeria monocytogenesの検出条件を定めた。今回は、実験的に本菌の遭遇しうる環境状態を設定し、その条件下での本菌のVBNC化を観察した。また、その菌の酵素抗体法による検出方法も検討した。
材料と方法:L.monocytogenes4b菌1株を使用した。デントコーン畑の土壌の水溶液1ml当り静止期の生菌数が約10^6個になるように浮遊し、4℃または0℃に40日間設置し、その間定期的に生菌数、総菌数とVBNC化した菌数を測定した。その菌液は60℃で30分間加熱後、および紫外線照射15分間後にも、上記同様の測定を行った。
結果と考察:4℃では、VBNC化した菌体は設置時間が長期化する程検出率が高まった(40日目に1.5から5%)。この間の生菌数、総菌数はほぼ一定であり、1ml当りの菌数は、それぞれ4×l0^5から2×l0^6、および2×l0^6から3×l0^6の範囲にあった。また、0℃に設置した菌でもほぼ同様の結果が得られた。即ち、本菌は土壌の如き低栄養状熊でかつ低温下でVBNC化することが示唆された。一方、加熱処理後あるいは紫外線照射後にはVBNC化した菌体は認められなかった。菌液をホルマリンで固定後に、ペルオキシダーゼ標識した抗リステリア抗体で37℃、30分間反応させ、発色基質としてTMBを2分作用させることでリステリアを特異的に染色できた。即ち、この染色条件で大腸菌など他の細菌は染色されなかったため、雑菌の多い白然界でのリステリアの発見が可能と判断できた。
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