転写調節因子を介する遺伝子発現制御機構の直視下解析

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10670034
• 研究機関: 関西医科大学
• 研究代表者: 渡辺 淳 関西医科大学, 医学部, 助教授 (40148557)
• キーワード: Ah受容体 / DNA / DNA転写調節因子 / CYP1A / 生物発光 / 原子間力顕微鏡

研究概要

1.3'methylchoranthrene(MC)処理後の肝細胞から単離精製したアリルハイドロカーボン受容体(AhR)標品の構造に一部問題があることがわかった。そこで、単離標品に代えて、大腸菌にAhR cDNAを組み込んだλファージを感染させ、プラークハイブリダイゼーションの後にAhR蛋白を得た。これを、CYP1A1 DNAのXREを含む5'flanking領域and/or Arntとグラファイト基板上で反応させ、原子間力顕微鏡(AFM)で観察した。XREへのAh受容体の結合により、100nmレベルでは、著明なDNA高次構造の変化は認められなかった。現在、1nmレベルの構造を解析中である。(交付申請書記載の研究実施計画1,5および6項に対応)。
2.培養肝細胞系(H4IIE)にDMSOで可溶化したMCを加え、MC投与後のAhR,ArntおよびHSP90の動態を免疫組織化学法で検出し、高感度蛍光法および高感度化学発光法で調べた結果、AhRからのHSP90の解離部位が、核でなく、細胞質であることが明らかとなった。(交付申請書記載の研究実施計画7項に対応)。
3.蛍光側光および高精度フォトンカウンティングによる定量化のための技術的検討を行い、luminol発光法については定量法を確立した。より感度の高いECR法については、正確な定量化まであと一歩のところまでこぎつけ、現在、実験を継続中である。(交付申請書記載の研究実施計画7項に対応)

研究成果

• [文献書誌] Watanabe,J.: "Changes in the density of cytochrome P-450 2B1/2 molecules in the membrance of endoplasmic reticulum in perivenular,midzonal and periportal hepatocytes of rats after administration of phenobarbital."Acta Histochem.Cytochem.. 32. 321-326 (1999)
• [文献書誌] Watanabe,J.: "Amplification of immunostaining intensity by the peroxidase-antiperoxidase,avidin-biotin-peroxidase complex or catalyzed signal amplification method gives erroneous antigen content in sections."Acta Histochem.Cytochem.. 32. 407-413 (1999)
• [文献書誌] Kanamura,S.: "Cell Biology of cytochrome P-450 in the liver."Int.Rev.Cell Biol.. 198. 109-152 (2000)
• [文献書誌] Watanabe,J.: "Effect of phenobarbital on intralobular expression of CYP2B1/2 in livers of rats.Difference in the expression between signal and repetitive administrations."Biochem.Pharmacol.. (in press).
• [文献書誌] Takeda,T.: "Rifampicin suppresses hepatic CYP2E1 expression and minimizes DNA injury caused by carbon tetrachloride in perivenular hepatocytes of mice."Alchol.Clin.Exp.Res.. (in press).