がん細胞の分化に伴うエンドセリン受容体の発現調節機構

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10670084
• 研究機関: 鳥取大学
• 研究代表者: 二宮 治明 鳥取大学, 医学部, 助教授 (80212124)
• 研究分担者: 岡本 安雄 京都大学, 大学院・医学研究科, 助手 (80293877)
• キーワード: エンドセリン / 受容体 / カベオラ / コレステロール

研究概要

Endothelin receptor type A(ETA)の細胞内取り込み機構を、epitope(myc)-tagged ETA を発現するCHO細胞を用いて、細胞表面mycーETAのflow cytometryと、蛍光標識ET-1を用いたin situ binding assay により検討した。ET-1/ETA complex の internalization は、nystatin/filipin により阻害されるが、chlorpromazine/hypertonic sucrose では阻害されなかった。ET-1は、ETAと同時に、caveolin の細胞内移行を惹起したが、この移行も nystatin により阻害された。これらの結果より、default の状態では、ET-1/ETA complex の internalization は、clathrin-coated pits ではなく、 caveloa を介するものと考えられた。細胞を cholesterol oxidase で処理し、細胞表面の cholesterol を減少させると、caveolin は細胞表面から消失し、Golgi 体に移行した。この状態では、ET-1/ETA complex の internalization は、 chlorpromazine/hypertonic sucrose により阻害されるが、nystation/filipin では阻害されなかった。さらに、 dominant negative βーarrestin は、cholesterol oxidase 処理後の細胞でET-1/ETA complex の internalization を阻害したが、処理しない細胞では無効だった。以上の結果から、CHO 細胞において、ET-1/ETA complex は clathrin-coated pits と caveola のいずれの経路でも internalize されうること、細胞表面の cholesterol 量がその経路の選択を決定する要素のひとつであること、が示された。

研究成果

• [文献書誌] Okamoto Y.et al.: "Cholesterol oxidation switches the internalization pathway of endothelin receptor type A from caveolae to clathrin-coated pits in Chinese hamster ovary cells"J.Biol.Chem.. (2000)
• [文献書誌] Zhang H,et al.: "Mutational analysis of TSC1 and TSC2 genes in Japanese patients with tuberous sclerosis complex"J,Hum,Genet.. 44. 391-396 (1999)
• [文献書誌] Hosokawa H.et al.: "Neuron-specific expression of cationic amino acid transporter 3 in the adult rat brain"Brain Res.. 838. 158-165 (1999)
• [文献書誌] Yamamoto T.et al.: "NPC1 gene mutations in Japanese patients with Niemann-Pick disease type C."Hum.Genet.. 105. 10-16 (1999)
• [文献書誌] Shimizu H,et al.: "Adhesion of cultured bovine aortic endothelial cells to laminin-1 mediated by dystroglycan"J.Biol.Chem.. 274. 11995-12000 (1999)
• [文献書誌] Inui T.et al.: "Selective activation of excitation-contraction coupling pathways by ET_A and ET_B receptors in guinea pig tracheal smooth muscle"Br.J.Pharmacol.. 126. 893-902 (1999)