Cre/loxPターゲッティングシステムを用いた平滑筋特異的変異マウスの作成

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10670107
• 研究機関: 大阪府立成人病センター研究所
• 研究代表者: 高橋 克仁 大阪府立成人病センター研究所, 第5部, 主任研究員 (40211338)
• キーワード: カルポニン / 平滑筋特異遺伝子 / トランスジェニックマウス / Cre / loxPシステム

研究概要

Creトランスジェニックマウスの作成
ヒトカルポニン遺伝子とヒトSM22α遺伝子のプロモーターをクローニングし、ルシフェラーゼレポーターシステムを用いてそれぞれの基本転写領域を決定した。未分化間葉系細胞やクローン化した平滑筋を用いた、欠失変異体のプロモーター活性の測定により、SM22α遺伝子は、既に報告されているマウスプロモーターと同様、翻訳開始点の上流約400bpの領域に平滑筋での発現を可能にする転写活性があることを明らかにした。カルポニン遺伝子は、翻訳開始点の上流約400bPの領域に平滑筋での発現を可能にする転写活性があることを明らかにした。両プロモーターの下流に、Cre酵素遺伝子を挿入したCre発現カセットを作製した。Cre酵素遺伝子は核内移行シグナルをもち、5'端と3'端にそれぞれSV40とglobin遺伝子のポリA構造をもつ(pxAWNCre)。Cre酵素遺伝子を挿入した発現カセットをマウス受精卵の前核にマイクロインジェクションした。
今後の研究計画
次年度はプロモーター由来の平滑筋特異的なCre酵素の発現を、組織抽出液のCre酵素活性の測定と、loxP部位をもつLacZ遺伝子を導入した標識マウスとの交配により検定し、発現効率の高いマウスを選択する。その後、loxP部位をもつ相同組み換え遺伝子をもつマウスとの交配により、平滑筋特異的な遺伝子欠失マウスを得る予定である。

研究成果

• [文献書誌] Yoshikawa H.: "Mice lacking smooth muscle calponin display increased bone formation that is associated with enhancement of bone morphogenetic protein responses." Genes to Cells. 3. 685-695 (1998)
• [文献書誌] Fujikawa H.: "Activation of protein kinases in canine basilar artery in vasospasm." Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 19. 44-52 (1999)
• [文献書誌] Parker C.A.: "Cytoskeletal targeting of calponin in differentiated,contractile smooth muscle cells of the ferret." Journal of Physiology(London). 508. 187-198 (1998)
• [文献書誌] Yamamura H.: "Expression of the smooth muscle calponin gene in human osteosarcoma and its possible association with prognosis." International Journal of Cancer. 79. 245-250 (1998)
• [文献書誌] Kim B.-K,: "Increased contractility of rat uterine smooth muscle at the end of pregnancy." Comparative Biochemistry Physiology. 121. 165-173 (1998)
• [文献書誌] Ueki N.: "Induction of calponin-h1 by transforming growth factor-b1 in cultured human lto cells,L190." Biochimica Biophysica Acta. 1403. 28-36 (1998)
• [文献書誌] Yamamura H.: "Ischemic Heart" Mochizuki S.,Takeda N.,Nagano M.Dhalla N.S., 87-95 (1998)