Cre/loxPターゲティングシステムを用いた平滑筋特異的変異マウスの作製

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10670107
• 研究機関: 大阪府立成人病センター研究所
• 研究代表者: 高橋 克仁 大阪府立成人病センター研究所, 第5部, 主任研究員 (40211338)
• キーワード: カルポニン / SM22 / トランスジェニックマウス / 血管平滑筋 / Cre / loxP

研究概要

成体では平滑筋細胞特異的に発現しているヒトカルポニン遺伝子とそのホモログであるSM22遺伝子をクローニングした。ルシフェラーゼレポーターアッセイによって、両遺伝子プロモーターの平滑筋細胞での発現に必須な領域を同定した。続いてそのプロモーターをCre/loxP発現制御系を用いて、培養血管内皮細胞と平滑筋細胞で解析した。LacZ標識遺伝子の発現を指標にすると、血管平滑筋細胞:内皮細胞の発現比率は、カルポニンプロモーターで22倍、SM22プロモーターでは15倍であり、いずれも平滑筋細胞に極めて特異性の高いプロモーターであることを明らかにした。カルポニンとSM22プロモーターをCre recombinaseの上流に連結し、マウス受精卵に導入してそれぞれ5-7系統のトランスジェニックマウスを作製した。一方、レポーターとして、CAGプロモーターの下流に2つのloxP部位にはさまれたCAT遺伝子とその3'側にlacZ遺伝子を連結したコンストラクトをマイクロインジェクションして、トランスジェニックマウスを得た。この2種のトランスジェニックマウスの系統を樹立し、掛け合わせて、カルポニンとSM22プロモーターのin vivoでの平滑筋特異的な発現を、lacZ遺伝子の発現を指標にして追跡できるマウスを作製した。現在、ごのマウスを用いたミオシン軽鎖キナーゼ遺伝子とRhoキナーゼ遺伝子の平滑筋特異的な欠失マウスを作製する実験が進行中である。

研究成果

• [文献書誌] Tohru Sugimoto, Katsuhito Takahashi, et al.: "A malignant rhabdoido-tumor cell line showing neural and smooth-muacle-cell"International Journal of Cancer. 82. 678-686 (1999)
• [文献書誌] Hirokazu Fujikawa, Katsuhito Takahashi, et al.: "Activation of protein kinases in canine basilar artery in vasospasm"Journal of Cerebral Blood flow and Metabolism. 19. 44-52 (1999)
• [文献書誌] Masayo Yagi, Katsuhito Takahashi, et al.: "Basic calponin expressing human neuroblastoma cell line of KP-N-YS"Human Cell. 11. 231-238 (1998)
• [文献書誌] Hideki Yoshikawa, Katsuhito Takahashi et al.: "Mice lacking smooth muscle calponin display increased bone formation that is"Cenes to Cells. 3. 685-695 (1998)
• [文献書誌] Christoopher A. Parker, Katsuhito Takahashi, et al.: "Cytoskeletal targeting of calponin in differentiated, contractile smooth muscle cells"Journal of Physiology (London). 508. 187-198 (1998)
• [文献書誌] Hisako Yamamura, Katsuhito Takahashi, et al.: "Expression of the smooth muscle calponin gene in human osteosarcoma and its"International Journal of Cancer. 79. 245-250 (1998)
• [文献書誌] Hisako Yamamura, Katsuhito Takahashi, et al.: "Structure and expression of calponin in arterial smooth muscle cells. In Ischemic Heart"edited by Mochizuki S., Takeda N., Nagano M. Dhalla N. S.. 87-95 (1998)