赤痢アメーバの接着因子に対する遺伝子組換え型ヒトモノクローナル抗体の作製

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10670240
• 研究機関: 東海大学
• 研究代表者: 橘 裕司 東海大学, 医学部, 助教授 (10147168)
• キーワード: 赤痢アメーバ / ヒトモノクローナル抗体 / レクチン

研究概要

赤痢アメーバの表面レクチンは宿主細胞への接着に重要な役割を果たしており、それに対するマウスモノクローナル抗体は、モデル動物において赤痢アメーバによる肝膿瘍形成を阻止できることが知られている。そこで、赤痢アメーバ症の治療や予防への応用をめざし、遺伝子工学的手法を用いてヒトモノクローナル抗体の作製を試みた。赤痢アメーバ症患者の末梢血液中のリンパ球を出発材料とし、RT-PCRによってH鎖(γ)のFd領域とL鎖(κ)をコードする遺伝子をそれぞれ増幅した。これら2つの遺伝子断片を発現ベクターpFab1-His2に組込み、大腸菌JM109にトランスフォームしてライブラリーを作製した。平成11年度は、抗体遺伝子のスクリーニング方法の改良を行った。コロニーをニトロセルロース膜上に移し、遺伝子の発現を誘導した後、大腸菌を溶解した。このニトロセルロース膜を赤痢アメーバ抗原と反応させ、次にペルオキシダーゼ標識した患者由来のlgGと反応させることで、抗アメーバ抗体産生コロニーを検出した。その結果、約5万個のコロニーの中から、赤痢アメーバと強く反応する1クローンが得られた。調べた限り赤痢アメーバのすべての株と反応したが、病原性のないEntamoeba disparなど、他種アメーバとは反応しなかった。赤痢アメーバの生虫体を用いた間接蛍光抗体法でも陽性反応が見られ、ウエスタンブロットにおいて260kDaの抗原と反応したことから、Gal/GalNAcレクチンを認識していると思われた。赤痢アメーバ虫体をこのヒト抗体で前処理したところ、ヒト赤血球への接着反応が有意に抑制され、この抗体がアメーバ症の治療や予防に応用できる可能性が示峻された。

研究成果

• [文献書誌] Tachibana, H. et al.: "Bacterial expression of a neutralizing mouse monoclonal antibody Fab fragment to a 150-kilodalton surface antigen of Entamoeba histolytica"Am. J. Trop. Med. Hyg.. 60(1). 35-40 (1999)
• [文献書誌] Cheng, X.-J. et al.: "Protection of hamsters from amebic liver abscess formation by a monoclonal antibody to a 150-kDa surface lectin of Entamoeba histolytica"Parasitol. Res.. 85(1). 78-80 (1999)
• [文献書誌] Tachibana, H. et al.: "Preparation of recombinant human monoclonal antibody Fab fragments specific for Entamoeba histolytica"Clin. Diagn. Lab. Immunol.. 6(3). 383-387 (1999)
• [文献書誌] Tachibana, H. et al.: "Entamoebadispar: Cloning and characterization of peroxiredoxin genes"Exp. Parasitol.. 94(1). 51-55 (2000)
• [文献書誌] Tachibana, H. et al.: "Asymptomatic cyst passers of Entamoeba histolytica but not Entamoebadispar in institutions for the mentally retarded in Japan"Parasitol. Int.. 48(印刷中). (2000)
• [文献書誌] Tachibana, H. et al.: "Ertamoebadispar, but not E. histolytica, detected in a colony of chimpanzees in Japan"Parasitol. Res.. 86(印刷中). (2000)