| 研究概要 |
1.FURTA法によって単離し、ホモロジー検索によって有望と思われた腸炎ビブリオ(VP)、Vibrio mimicus(VM),Vibrio vulnificus(VV)遺伝子断片には鉄制御遺伝子に特徴的なFur box配列が認められ、さらに精製Fur蛋白質を用いてのgel mobility shift assayでシフトバントbを確認した。2.鉄獲得に関与すると思われる遺伝子断片からDig-標識プローブを作成し、当該遺伝子全長をクローニングした。現在迄に、VPよりvibrioferrin(VPの産生する鉄輸送キレーター),ferrichromeおよびaerobactinに対する外膜レセプター蛋白を、またVMからhemeに対する外膜レセプター蛋白をコードする遺伝子の解析を行なった。興味深いことに、VPでは自身の産生する鉄キレーターに加えて、他の細菌の産生する鉄キレーターを利用する系を持っており、しかもオペロンを構成していることが判明した。VMのhemeレセプタ一遺伝子にはFur boxを共有して逆方向に転写活性化蛋白をコードする遺伝子が見つかった。このような例は今だ報告がない。これら遺伝子産物の機能をより明確にするため、自殺ベクターでの相同組替えによる遺伝子破壊法や蛋白大量発現系の確立を行なっている。3.VP,VM,VVよりそれぞれのMn-SOD遺伝子(sodA)をクローニングし、解析した。いずれもFur boxを持つ鉄制御遺伝子であり、Mn-SOD酵素は鉄欠乏下にのみ発現した(投稿準備中)。4.以上の遺伝子の外に、二成分制御系、鉄キレーターの生合成系や輸送系の遺伝子などもクローニングを完了し、只今解析中である。
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