ウイルスRNA依存性RNAポリメラーゼの構造-機能相関の研究

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10670291
• 研究機関: 久留米大学
• 研究代表者: 豊田 哲也 久留米大学, 医学部, 教授 (00197972)
• キーワード: インフルエンザウイルス / C型肝炎ウイルス / RNAポリメラーゼ / サブユニット / プロテアーゼ

研究概要

インフルエンザウイルスRNAポリメラーゼは、PB1・PB2・PAという3つのサブユニットからなり、ウイルスゲノムRNAの転写・複製を触媒する。これまでの研究からそれぞれのサブユニットの機能としてPB1はRNA合成活性、PB2はmRNAキャップ結合活性を有し、PAはゲノム複製に必須であることが明らかとなっている。そこで、細かな機能部位の同定を目的として、互いにオーバーラップする約150アミノ酸ごとのペプチドに対するポリクローナル抗体を作製ての抗体スキャニング、サブユニット結合部位のアミノ酸の同定を行った。その結果、PB2のN末端(1-259)とPAのC末端(501-617)にRNA合成活性の阻害部位、PB2のN末端(1-159)と中央部(305-559)、PB1のN末端(1-222)、PAの中央部(301-517)とC末端(601-716)にキャップ依存性RNase活性の阻害部位がマップされた。さらに、PB2の中央部(402-559)にはキャップRNA結合部位がマップされた。また、機能の不明確であったPAについて、昆虫細胞で発現・精製した標品を用いてセリンプロテアーゼ活性を持つことを証明した。
またC型肝炎ウイルスRNAポリメラーゼをコードするNS5B遺伝子を大腸菌で発現させ、それを抗原として家兎を免疫し、抗体を作製した。完全長のNS5Bは昆虫細胞、大腸菌、酵母、動物細胞のいずれの系を用いても、分解がおこり、蛋白の調製ができなかったが、C末端21残基の疎水性アミノ酸を除いて昆虫細胞で発現させたところ、単一バンドの蛋白として精製できた。現在、この標品を用いて、生化学的検討を行っている。

研究成果

• [文献書誌] Shoji Kaminaka: "Studies of Bovine Enterovirus Structure by Ultraviolet Resonance Raman Spectroscopy."J.Virol.Methods. 77. 117-123 (1999)
• [文献書誌] Kenji Maseunaga: "Molecular mapping of influenza virus RNA polymerase by site-specific antibodies."Virology. 256. 130-141 (1999)
• [文献書誌] Hiroyuki Masuda: "Subsitution of amino acid residue in influenza A virus hemagglutinin affects recognition of glycosphingolipid containing N-glycolylneuraminic anid."REBS LETT.. 464. 71-74 (1999)
• [文献書誌] Katsuro Tsuji: "No association of Borna disease virus with psychiatric disorders among patients in Northern Kyushu,Japan."J.Med.Virol.. (印刷中). (2000)
• [文献書誌] 豊田哲也: "たかが風邪、されど風邪"日本医事新報ジュニア版. 379. 7-10 (1999)
• [文献書誌] 豊田哲也: "インフルエンザの構造と遺伝子"化学療法の領域. 15. 41-46 (1999)
• [文献書誌] 豊田哲也: "感染分子機構から見た治療薬開発の方向性"治療学. 34. 44-49 (2000)