| 研究概要 |
本研究の目標はEBVゲノム複製保持機構であるOriP-EBNA-1複製系の解明である。現在、細胞DNA複製開始反応関係因子がOriP複製においても重要な役割を担っているものと考えられている。そこで従来より行ってきた複製開始制御蛋白の機能解析を、本研究においてさらに押し進めた。現在、複製の細胞周期調節について以下のような仮説モデルを想定している。hORC-hCDC6は核マトリックス上に存在しており、そこでhORCに結合しているクロマチン領域が複製開始点の基点となる。G1期にhORC-hCDC6が、hMCM6量体をクロマチン領域に結合させる。S期にhMCMはリン酸化によって活性化され、今だ不明だが複製に必須の役割を行い、その後クロマチンから遊離する。一旦遊離したMCMはCdkキナーゼによるリン酸化によって次のG1期までクロマチンへの再結合が抑制される。さて、これらDNA複製蛋白がOriP複製系の制御も行っているとすると、考えられる可能性は、EBNA-1がこれらの蛋白との結合等の相互作用をしているということであると思われたので、それを検討した。しかし、種々の技術を駆使して、複製開始制御蛋白とEBNA-1との相互作用の同定を試みたが、有意な結果は得られなかった。最近の,EBNA-1がOriPからの複製に必須ではないかもしれないとの報告とも考え合わせると、その複製はむしろ細胞因子に完全に依存しており、EBNA-1それを増強しているだけなのかもしれない。今後は、EBNA-1および細胞複製開始蛋白が、EBVゲノムとin vivoで結合しているのかどうか、結合しているならどの部位に結合しているのか、そしてそれがどのような細胞周期調節を受けているのか、を明らかにすることが重要であると思われる。現在クロマチン免疫沈降法を用いてその検討を進めつつある。
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