CAT遺伝子導入マウスを用いた病的自己抗体産生機序の解析

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10670310
• 研究機関: 順天堂大学
• 研究代表者: 広瀬 幸子 順天堂大学, 医学部, 助教授 (00127127)
• 研究分担者: 張 丹青 順天堂大学, 医学部, 助手 (40296877)
• キーワード: 全身性エリテマトーデス / IgG抗DNA抗体 / 自然抗体 / 自己抗体 / 抗体可変領域遺伝子 / 体細胞突然変異 / 親和性成熟 / CAT遺伝子

研究概要

全身性エリテマトーデス(SLE)においては、自己抗体の産生が病態形成に深く関わっている。SLEに見られる代表的自己抗体である抗DNA抗体についてのハイブリドーマ株の樹立や抗体可変領域遺伝子の解析から、自己抗体が病原性を獲得する過程で起こる重要な変化は、抗体のIgMからIgGへのクラス転換、抗体可変領域遺伝子の体細胞突然変異とこれに伴う親和性成熟、高親和性クローンの選択ならびにクローン性増殖であることが明らかとなっている。重要な問題は、病原性を獲得する以前の低親和性IgMクラス自己抗体は、本来正常個体に存在する、自己の老廃細胞処理に働いている自然抗体と性質が同じであるにもかかわらず、この抗体がSLE患者においてのみ可変領域体細胞突然変異をともう病的自己抗体に変換するのは何故かという点である。本研究ではこの点を解析するため、抗体重鎖のプロモーターとイントロンエンハンサーの間にchloramphenicol acetyl transferase(CAT)遺伝子を繋いだ遺伝子を導入したSLE自然発症New Zealandマウス系の樹立を行い、CAT遺伝子の変異を指標として、抗DNA抗体の可変領域遺伝子の体細胞突然変異の機構を探ることを目的としている。
現在までにCAT遺伝子導入C57BL/6マウスをNZBおよびNZWマウスと交配し、CAT遺伝子の存在を目安に各々NZBおよびNZWに6代退交配し、このCAT導入NZBとNZWを交配したF1マウスを作製している。このF1マウスではIgG抗DNA抗体産生を伴うSLE病態が発症することが確認されたので、現在このマウスから抗DNA抗体産生ハイブリドーマ株を樹立している。今後、樹立したハイブリドーマ株の抗体可変領域遺伝子の体細胞突然変異の有無とCAT遺伝子変異の有無との相関を検討する予定である。

研究成果

• [文献書誌] Haruta,K.et al.: "Monoclonal anti-cardiolipin antibodies from NZB x NZW F1 mouse react to thrombomodulin." J.Immunol.160. 253-258 (1998)
• [文献書誌] Fujimura,T.et al.: "Dissection of the effects of tumor necrosis factor-α and classII gene polymorphisms within the MHC on murine systemic lupus erythematosus." Int.Immunol.10. 1467-1472 (1998)
• [文献書誌] Hattori,S.et al.: "L-selectin-specific autoantibodies in murine lupus:possible invol-vement in abnormal homing and polarization of CD4^+ T cell subsets." J.Immunol.161. 1231-1238 (1998)
• [文献書誌] Ishikawa,S.et al.: "A subset of CD4^+ T cells expressing CD69 in murine lupus:possible abnormal regulatory role for cytokine imbalance." J.Immunol.161. 1267-1273 (1998)
• [文献書誌] Ida,A.et al.: "Multigenic control of lupus-associated antiphospholipid syndrome in a model of (NZW x BXSB) F1 mice." Eur.J.Immunol.28. 2694-2703 (1998)
• [文献書誌] Hamano,Y.et al.: "Susceptibility alleles for aberrant B-1 cell proliferation invol-ved in spontaneously occurring B cell chronic lymphocyticーーーー" Blood. 92. 3772-3779 (1998)