新しい膜融合関連蛋白(R21蛋白)の機能および遺伝子解析

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10670416
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 中村 稔 九州大学, 医学部, 助手 (40217906)
• 研究分担者: 中野 修治 九州大学, 医学部, 講師 (40164248)
• キーワード: 膜融合 / HTLV-1 / CXCケモカイン / HTLV-1レセプター

研究概要

まず、HTLV-I感染の結果標的細胞に生じる多核巨細胞(合胞体)形成を増強する単クローン抗体を単離し、その抗体の認識する分子をウシ血清より精製した。部分アミノ酸配列の結果からR21分子は既知のCXCケモカイン(Platelet Factor 4)と約90%のホモロジーがあることが判明した。HIVのco-receptorがCCR-5やCXCR-4などのケモカインレセプターであることが近年報告されたことから、R21分子のレセプター(CXCR-?)がHTLV-1のco-receptorである可能性があり、R21分子の膜融合における作用機構の詳細な解析を進めている。
次にHTLV-1レセプターの解析・クローニングを行うためにcell to cellの感染系として、HTLV-1 envやluciferase発現ベクターを用いてcell fusion-dependent reporter gene activation assayを確立した。また、cell freeの感染系としてVSV-pseudotype(VSV-GF-HTLV-1 env)を作製した。これらの系を用いて、HTLV-1のレセプターはリンパ球だけでなく上皮系の種々の細胞膜にも存在すること、cell freeのHTLV-1ウイルスは感染効率がcell to cellの感染系に比して低いもののHepG2や293T細胞には効率よく感染することが示された。また、標的細胞を種々のchemical modification後の感染実験から、HTLV-1レセプターは蛋白ではなくglycosaminoglycanやphospholipidより構成されることが強く示唆された。現在、レセプターを高発現した細胞(HepG2)のcDNAライブラリー発現ベクターとレセプターを発現していない細胞株(HuH7)を用いてHTLV-1レセプター関連分子のexpression cloningを開始している。

研究成果

• [文献書誌] B.Kitze,K.Usuku,Y.Yamamoto.S.Yoshiki,M.Nakamura et al.: "Human CD4^+ T lymphocytes recognize a highly conserved epitope of human T lymphotropic virus type I(HTLV-1)env gp21 restricted by HLA DRB1^*0101"Clin. Exp. Immunol.. 111. 278-285 (1998)
• [文献書誌] Shinji Shinoda,Judy V.D.Water,Aftab Ansari,Minoru Nakamura et al.: "Identification and precursor frequency analysis of a common T cell epitope motif in mitochondrial autoantigens in primary biliary cirrhosis"J. Clin. Invest.. 102. 1831-1840 (1998)
• [文献書誌] K.Okuma,M.Nakamura et al.: "Identification of a novel bovine serum protein which is involved in HTLV-I-Induced syncytium formation."Arch. Virol.. 144. 1-18 (1999)
• [文献書誌] K.Okuma,M.Nakamura et al.: "Host range of human T-cell leukemia virus type I analyzed by a cell fusion-dependent reporter gene activation assay."Virology. 254. 235-244 (1999)
• [文献書誌] K.Okuma,M.Nakamura,S.Nakano,Y.Yanagi and Y.Niho: "Molecular Target for hematological malignancies and cancer : Analysis of Viral entry and cell fusion mediated by HTLP-1 envelope glycoproteins"Kyushu University Press (in press). (2000)