ランダムRNAライブラリー法を用いた膠原病患者自己抗体のRNAエピトープの解析

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10670427
• 研究機関: 順天堂大学
• 研究代表者: 高崎 芳成 順天堂大学, 医学部, 助教授 (80154772)
• 研究分担者: 竹内 健 順天堂大学, 医学部, 講師 (20281355)
• キーワード: 膠原病 / 自己抗体 / RNA / エピトープ / 自己免疫

研究概要

昨年度、我々は、25塩基のランダムな配列のRNAライブラリーを用いたスクリーニング法により、膠原病患者血清と特異的に反応する新たなRNA抗原の塩基配列を決定し、このRNAと各種膠原病患者血清との反応性を検討した。その結果、シェーグレン症候群(SjS)患者血清より、これと結合するRNAの塩基配列、TS1・RNAが決定された。TS1・RNAはCGAAAGUCCGAUCGGCGUAAUGUCAの塩基配列を有し、SjS患者群血清61例中32例、およびSjSの合併のない混合性結合組織病(MCTD)患者群血清6例中3例との反応を認めた。しかし、SjSを合併しない他の膠原病患者血清とは反応を示さなかった。このTS1・RNAは抗SS-A抗体陽性血清と強く反応する傾向を示したが、SS-A抗原蛋白の添加にても抑制は見られなかった。また塩基配列上もhYRNAとの明らかな相同性を認めず、genebankのコンピューター検索にてもTS1・RNAと相同性を持ったDNA、RNAは見つからなかった。本年度はこのMCTDおよびSjS患者血清と反応するRNAエピトープを解析するために、TS1-RNAの一部の塩基配列を変異させたものを作成し、患者血清との反応性を調べた。TS1-RNAの25塩基のうち17番から25番目を変異させたRNA、8番から15番目を変異させたRNA、2番から7番目を変異させたRNA、TS1-RNAと全く異なった塩基配列のcontrol RNAを用意し、それぞれのRNAと患者血清、正常人血清との反応性を検索した。血清はSjS患者3例、正常人2例について検索を行い、反応性は%Bindingとして定量した。患者血清により反応性のパターンに差が認められたが、いずれの変異RNAも元のTS1-RNAに比べると、反応性が弱い傾向がみられた。対照の正常人血清はいずれのRNAとも明らかな反応性を認めなかった。この結果から、TS1-RNAの25塩基全体が患者血清との反応に関与している可能性が示唆された。

研究成果

• [文献書誌] Takasaki Y, Abe Tokano Y, Hashimoto H: "The expression of LFA-1, ICAM-1, CD80 and CD86 molecules in lupus patiens: Implication for immunotherapy."Intern Med. 38. 175-177 (1999)
• [文献書誌] Abe K, Takasaki Y, Ushiyama C, Asakawa, J, Fukazawa T, et al: "Expression of CD80 and CD86 on peripheral blood Tlymphocytes in patients with systemic lupus erythematosus."J Clin Immunol. 19. 58-66 (1999)
• [文献書誌] Shiroki K, Isoyama T, Kuge S, Ishii T, Ohmi S, Hata S, Takasaki Y, et al: "Intracellular redistribution of trunctuated La protein produced by Poiovirus 3Cpro-mediated cleavage."J Virol. 73. 2193-2200 (1999)
• [文献書誌] Isoyama T, Kamoshita N, Yasui K, Iwai A, Shiroki K, Toyoda H, Takasaki Y, et al: "Lower concentration of La protein required for internal ribosome entry on hepatitis C virus RNA than on poliovirus RNA."J Gen Virol. 80. 2319-2327 (1999)
• [文献書誌] 高崎芳成: "混合性結合組織病、内科学エッセンス"鈴木一、橋本博史編、朝倉書店. 3
• [文献書誌] 高崎芳成: "膠原病の内臓病変、内科学II"黒川清、松沢佑二編、文光堂. 4