| 研究概要 |
1. 方法
1) Vectorの作成と遺伝子導入
ブタPR-39full length cDNAおよびマウスsyndecan-1 full length cDNAをpRc/CMV vectorに組み込み,lipofection法によりヒト肝癌細胞(HLF)に導入した。
2) In vitro invasion assay Boyden chamberにtype-1 collagenをコートして,filterを浸潤する細胞数を数えた。
3) Phagokinetic track motility assay
金コロイドをカバースリップにコートして細胞によりコロイドが貧食された面積を計った。
4) Actinの染色
rhodamine-conjugated phalloidinを用いて蛍光および共焦点レーザー顕微鏡にて観察した。
2. 結果
1) PR-39遺伝子のヒト肝癌細胞株への導入
PR-39遺伝子をSyndecan-1の発現が低下していて高い浸潤能を特つHLF細胞に導入した。トランスフェクタントは高いSyndecan-1の発現誘導とともに,type-l collagenに対して著しい浸潤能の低下を示し,phagokinetic track法を用いた運動能の検索でも低下を示した。細胞形態は紡錘形からコンパクトな多角形へと変化し,Actin構築の変化も認めた。
2) Syndecan-1遺伝子のヒ卜肝癌細胞株への導入
マウスSyndecan-1遺伝子をHLE細胞に導入した。トランスフェクタントはtype-1 collagenに対して著しい浸潤能の低下を示したが,phagokinetic track法を用いた運動能の検索では変化は認められなかった。また,細胞形態またはActin構造にも変化は認めなかった。
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