| 研究概要 |
1.Clイオンチャネルに対するiNOS誘導の効果:単離したヒト気道上皮細胞にパッチクランプ法(whole cell clamp,inside-out patch)を適用し,単-Clイオンチャネル電流およびClチャネルの開確率を測定した.上皮細胞にiNOSを誘導するため,エンドトキシン(E.coli由来),IL-1β,TNFα,インターフェロンγの存在下で培養を行ったところ,Clコンダクタンス,Clチャネルの開確率の増加が観察された.また,その効果はヂキサメサゾンやマクロライドの添加により著明に抑制された.同時に行ったポーラログラフィーによるNO産生の評価では,上記サイトカインの刺激によりNOが遊離されることが確認された.
2.iNOS遺伝子発現の調節:ヒト気管支培養上皮細胞のmRNAを抽出し,RT-PCR法およびプリキャストゲル電気泳動を用いたノーザンブロット法にてcNOS,iNOS各々のmRNAの発現を評価した.その結果,エンドトキシン,IL-1β,TNFα,インターフェロンγで刺激すると,iNOSmRNAの発現が選択的に誘導され,またその効果はステロイドあるいはマクロライドの存在下で明らかな抑制を受けた.
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