ディフェレンシャルディスプレイ法による心不全特異的な心筋遺伝子発現の検出と同定

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10670646
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 木原 康樹 京都大学, 医学研究科, 助手 (40214853)
• キーワード: 心肥大 / 心不全 / RT-PCR

研究概要

本研究は、我々の開発したダール食塩感受性ラット心不全移行モデルにdifferential display RT-PCR法(DD法)を応用することにより、代償心肥大期と非代償心肥大期の間での遺伝子発現の差異を明らかにし、心不全期に特異的発現を示す遺伝子について抽出、クローニングする。これにより心不全移行期の際に誘導的役割を演ずるシングナリング系の存在を提示することを目的とした。DD法は2種類以上のサンプルを比較して、微妙な変化を含めた様々な挙動の転写物を同時に同定できることを特徴としている。実験対象とするダール食塩感受性ラットは、短期間に均一な経過で代償された求心性左室肥大より代償破綻した収縮性の低下した遠心性左室拡大への移行を呈する。遺伝学的にも純系化が確認されており、本研究にも適当である。昨年度において肥大期・不全期左室心筋、及び不全期右室心筋より各々のRNA抽出を終了した。本年度は、得られたフィンガープリントの比較を行い、挙動が一致していないバンドに相当するcDNAをゲルスライスPCRにて再増幅し、その産物を用いてTAクローニングを定法にて行った。現在複数の遺伝子コロニーが得られており、これらのコロニーから、インサートチェック、シーケンスおよび制限酵素マッピングにより目的のクローンを含むものを選択・同定を行っている。

研究成果

• [文献書誌] Takagi S,Kihara Y,Toyoda F et al.: "Cold acclimation of guinea-pig depressed contraction of cardiac papillary muscle"Am J Physiol. 276. R923-R928 (1999)
• [文献書誌] Fujita M,Nakae I,Kihara Y et al.: "Determinants of collateral development in patients with acute myocardial infarction"Clin Cardiol. 22. 595-599 (1999)
• [文献書誌] Fujita M,Kihara Y,Hasegawa K et al.: "Heparin potentiates collateral growth but not growth of intramyocardial endarteries in dogs with repeated coronary occlusion"International J Cardiol. 70. 165-170 (1999)
• [文献書誌] Sasayama S,Matsumori A,Kihara Y et al.: "New insights into the pathophysiological role for cytokines in heart failure"Cardiovasc Res. 42. 557-564 (1999)
• [文献書誌] Ikemoto M,Hasegawa K,Kihara Y et al.: "Development of enzyme-linked immunosorbent assay for acidic fibroblast growth factor and its clinical application"Clin Chim Acta. 283. 171-182 (1999)
• [文献書誌] 木原康樹、篠山重威: "合併症を伴った高血圧症の治療、心疾患、心肥大"日本臨床:2000年増刊「高血圧症」. 312-315 (2000)