アデノ随伴ウイルスを用いた循環器疾患の遺伝子治療法の開発

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10670675
• 研究機関: 自治医科大学
• 研究代表者: 池田 宇一 自治医科大学, 医学部, 助教授 (30221063)
• キーワード: 一酸化窒素 / アデノ随伴ウイルス / 遺伝子治療 / 心肥大 / 肺高血圧

研究概要

我々はアデノ随伴ウイルス(AAV)ベクターによる心・血管への遺伝子導入法の確立、さらに内皮型NO合成酵素(ecNOS)遺伝子導入による肺高血圧・心肥大の遺伝子治療法の開発を目指して研究を進めてきた.平成10-11年度の文部省科学研究費補助により、以下のような研究成果が得られた.
(1)AAVベクターによる心・血管への遺伝子導入
LacZ遺伝子を組み込んだβ-galactosidase発現ベクター(AAV-LacZ)を作製した.このAAV-LacZを用い、血管・心筋組織への遺伝子導入が高率に可能であること、さらに導入されたLacZ遺伝子は3ヶ月以上の長期にわたり発現が持続することを観察した.
(2)ecNOS発現ベクターの作製
ecNOS遺伝子を組み込んだAAVベクター(AAV-ecNOS)を作製し、ヒト293細胞へ導入した.293細胞へecNOS遺伝子を導入することにより、293細胞のMAPキナーゼ活性およびc-fosの発現は有意に抑制され、これに伴い293細胞のDNA合成能も有意に抑制された(J Pharmacol Exp Ther 292:387-393,2000).
(3)心筋肥大に対するecNOS遺伝子導入の効果
ラット培養心筋細胞にAAV-ecNOSを遺伝子導入した.遺伝子導入した心筋細胞では細胞内cGMPの上昇が認められ、またphenylephrine刺激による心筋細胞の肥大反応が有意に抑制された.さらに、このecNOS遺伝子導入による心肥大抑制作用は、NOS阻害剤であるL-NMMA存在下で完全に消失した.
以上の研究成果より、AAVベクターを用いたecNOSの心・血管への遺伝子導入が、肺高血圧・心肥大の新しい治療法として有用である可能性が明らかとなった.

研究成果

• [文献書誌] Ikeda,U.,Ikeda,M.,et al.: "Homocystein increases nitric oxide synthesis in cytokine-stimulated vascular smooth muscle cells"Circulation. 99. 1230-1235 (1999)
• [文献書誌] Nakagami,H,Ikeda,U.,et al.: "Coronary artery disease and endothelial nitric oxide synthase and angiotensin-converting enzyme gene polymorphism"J.Thromb.Thrombolysis. 8. 191-195 (1999)
• [文献書誌] Ohya,K.,Ikeda,U.,et al.: "Molecular cloning of a docking protein, BRDGI, that acts downstream on the Tec tyrosine Kinase"Proc.Nat.Acad.Sce.. 96. 11976-11981 (1999)
• [文献書誌] Umino,T.,Ikeda,U.,et al.: "AVP inhibits LPS- and IL-1β-stimulated NO and cGMP vai V1 receptor in cultured rat mesangial cells"Am.J.Physiol.. 276. F433-F441 (1999)
• [文献書誌] Maeda,Y.,Ikeda,U.,Shimada,K.: "Endogenously generated nitric oxide by nitric oxide synthase gene transfer inhibits cellular prolifertion"J.Pharmacol.Exp.Ther.. 292. 387-393 (1999)
• [文献書誌] 前田喜一、池田宇一、他: "心筋へのvascular endothelial growth factor 遺伝子導入による血管新生療法の試み"心筋の構造と代謝. 21. 13-18 (1999)