| 研究概要 |
血球分化、特にBリンパ球分化の仕組を分子レベルで明らかにするためにNF-E2転写因子Bach2の機能・発現調節機構の解析を進めた。
(1)Bach2の発現を12種類の非リンパ球系白血病細胞株と16種類のリンパ系細胞株で解析した。
その結果、8種類のB細胞性白血病細胞株で発現が認められた。
(2)正常B細胞(progenitor B,Immature B,Mature B cells)でBach2が発現していることがRT-PCR法で明かとなった。
(3)Bach2が癌抑制遺伝子としての機能を持つかどうか調べるために、Bach2をBach2が全く発現していないRAJI細胞にレトロウイルベクターを用いて遺伝子導入した。約80個のネオマイシン耐性クローンを抗Bach2抗体を用いてウエスタンブロット法で解析し、Bach2が大量に発現している6のクローンを得ることができた。ゲルシフト法で解析したところ、これらのクローンでは、強制発現させたBach2因子が小Mafタンパクとヘテロ二量体を形成し、NF-E2配列に特異的に結合することが確認された。ベクターのみを発現させたコントロール株ではNF-E2結合活性は認められなかった。そこで過剰発現されたBach2因子がRAJI細胞の増殖にどのような影響をおよぼしているかをメチルセルロースコロニー形成試験で解析した。コントロール株に比して、Bach2過剰発現株では、plating efficiencyがどの株も著しく低下していた(10〜40%)。
(4)Bach2遺伝子のP1ファージクローンを単離した。ヒトBach2遺伝子のP1クローンを単離して、遺伝子の構造をこの目的のために決定した。ただし、タンパクをコードしているエクソンをすべて含むクローンは単離することができたが、プロモーター領域を含む第一エクソンは、さらに数百kb上流に存在することが明かとなり、まだ単離できていない。
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