内因性肺動脈平滑筋細胞エラスターゼの分子生物学的同定に関する研究

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10670754
• 研究機関: 埼玉医科大学
• 研究代表者: 小林 順 埼玉医科大学, 医学部, 講師 (20153611)
• 研究分担者: 薗田 勝 共立女子大学, 家政学部・栄養学科, 助教授 (90112648)
• キーワード: エラスターゼ / 肺高血圧症 / 肺動脈 / 平滑筋細胞 / PCR / セリンプロテアーゼ

研究概要

本研究の初年度(平成10年度)に使用したprimerでのPCRで、明らかなプロテアーゼ活性を持つPCR productを精製することが出来なかった。そのため別な、セリンプロテアーゼ活性部位に関連したconservative sequence(porcine pancreatic elastase,PPEとhuman leukocyte elastase,HLE)より生成したdegenerate oligonucleotidesをprimerに使用し(primer1:5'-CCTCGGAGCGTTGGATGAA-3',5'-CTTCTGGGCAGGAACCGTG-GGA-3'.primer2:5'-CCAACGAGACACCCTGCTACAT-3',5'-TCCAGTCAATGAA-GGCGGAGAC-3')、PCR productの数、そのqualityをagarose gelにて確認したが、今回のprimerでは、全くPCR productが得られず、再び初年度のprimerに戻り、再検討した。その結果、初年度に得られた,elastaseとのhomologyがないPCR productとは全く別な476bpのPCR productが得られ、とりあえずそのsequenceを検討した。homology検索の結果、mouseのTリンパ球由来serine proteinaseの一部と59%のDNA配列にhomologyが認められた。ブタ肺動脈平滑筋細胞培養が思いの外難渋し、十分な検討が出来ないが、再度確認の上、screeningに移ることを今年度の目標とする。

研究成果

• [文献書誌] 小林 順: "実験室からベッドサイドへ;肺血管リモデリングと肺高血圧症"Cardiologist. vol4(1). 43-48 (1999)
• [文献書誌] 薗田 勝,小林 順 他: "血中S-ニトロソ化合物由来NOラジカルの呼気への排出"磁気共鳴と医学. vol10. 3-6 (1999)
• [文献書誌] 宮崎 孝,薗田 勝,小林 順 他: "エンドトキシン病態ラットにおける血中一酸化窒素関連化合物の変動"臨床病理. vol47(4). 370-373 (1999)
• [文献書誌] 菰田二一,小林 順 他: "広範囲,血液,尿化学検査,免疫学的検査(1)その数値をどう読むか、尿中アルカリフォスファターゼ"日本臨床. vol57. 133-135 (1999)
• [文献書誌] Toshiyuki Mastunaga, Jun Kobayashi et al: "Reactive Oxygen Species as a risk factor in verotoxin-1-exposed rats"Biochemical and Biophysical Research Communication. vol260. 813-819 (1999)
• [文献書誌] Jun Kobayashi et al: "Copper iron is associated with No release into exhaled air from intravenously injected No donor, S-nitrosoglutathione, in rat lung"Circulation. vol100. I588 (1999)
• [文献書誌] Fumiaki Kotake, Jun Kobayashi et al: "Nitric Oxide-related Compounds in Congenital Heart Defects and Pulmonary hypertension"Pediatrics International. (in press). (2000)
• [文献書誌] Jun Kobayashi, et al: "Correlation of anatomic and hemodynamical features with aortic valve leaflet cletorwizy in doubly ommitted subarterial VSD"Heart and Vessels. (in press). (2000)