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グルコース6リン酸脱水素酵素(G6PD)が薬剤耐性に関与するかをみるためにネオマイシンで選択可能なEukaryocyte系expression vector pCDNA3.1(-)に、1.6kbのcoding regionのみに短縮したG6PD遺伝子cDNAを組み込んだpCDNA3/G6PDと、それを反対方向に組み込んだpCDNA3/G6PD-Rを作成した。
これらvectorおよびpcDNA3.1(-)を培養細胞K562にTransFastを用いtransfectionを行った。G418で選択後2〜3週間後にstable transfectantを得た。
Northern BlotおよびRT-PCR法でpCDNA3/G6PDのみにmRNAの発現の増強がみられた。また蛋白レベルでも同様の所見を得た。
今後、さらにtransfectionの効率を高めつつ、cyclophosphamide(CPA)等の抗腫瘍剤に対して耐性となっているか否かを、細胞内還元型グルタチオン量、MDR1遺伝子の発現等を含めて多角的に検討する。さらに、アルデヒド脱水素酵素I型を組み込んだvectorも作成、両者co-transfectionした細胞の薬剤耐性獲得の程度を筆者らが作成したCPA耐性K562細胞と比較検討することにより、薬剤耐性におけるG6PD遺伝子の役割を明らかにする予定である。
一方、未治療の慢性リンパ性白血病(CLL)6例および既治療CLL2例の臨床検体を用いた検討では、G6PD遺伝子の発現には際立った違いはなかった。今後、症例数を増やすとともに、対象疾患を急性白血病等まで広げ、臨床検体でG6PD遺伝子が薬剤耐性と関連しているか否かを検討する予定である。
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