| 研究概要 |
グルコース6リン酸脱水素酵素(G6PD)が薬剤耐性に関与するかをみるために、ネオマイシンで選択可能なEukaryocyte系expresion vector PCDNA 3.1(-)に1.6kbのcoding regionのみに短縮したG6PD遺伝子cDNAを組み込んだPCDNA3/G6PDと、それを反対方向に組み込んだPCDNA3/G6PD-Rを作成した。これらvectorおよびPCDNA3.1(-)を培養細胞cos 7, k562にTransFastないしはTransferrifectionを用い、Transfedtionを行った。G418で選択後2〜3週間後にstable transfetantを得た。 PCDNA3.1(-),PCDNA3/G6PD-Rを導入した細胞ではmRNA,タンパクの発現に差はなかった。一方PCDNA3/G6PDを導入した細胞ではmRNAの発現が増強する傾向があったが、その強度は1.5倍以内にとどまった。G6PDタンパクの活性は0.18μmole/mg protein, 還元型グルタチオン6.4U/10^6cellsで、対照0.13, 4.5Uと比し、やや高値であったが顕著な差ではなく、LC90も10μM vs 5.5μMであった。臨床検査を用いた検討では慢性リンパ性白血病(CLL)10例、既治療例6例で差はなく、また前リンパ球性白血病PL2例、治療抵抗性の白血化症例3例でもmRNAタンパクの発現はなかった。以上より、G6PD遺伝子が薬剤耐性獲得に関与する直接的なdataは今のところ得られていない。しかし、G6PDのmRNA、タンパクが遺伝し導入した細胞で十分発現しているとはいい難くG6PD遺伝子を組み込んだレトロウイルスベクターを作成中である。
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